2018年, 第38卷, 第3期　刊出日期：2018-05-31

  

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论著
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  NG2(+)胶质细胞在Th1-EAE和Th17-EAE中的不同作用

  胡竹琴，刘振山，康自珍

  现代免疫学. 2018, 38(3): 177-185.

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  NG2⁺胶质细胞在EAE中的作用还不清楚。课题组应用PDGFRα-CreER特异地诱导白喉毒素在NG2⁺胶质细胞中表达，成功地在小鼠中枢神经系统中部分剔除NG2⁺胶质细胞。研究发现部分剔除NG2⁺胶质细胞的小鼠CNS中在诱导Active-EAE和Th1-EAE的发病过程中，表现为临床症状减轻、髓鞘蛋白脱落减少以及炎症细胞浸润减少，说明NG2⁺胶质细胞能够增强胶质细胞的作用以加重Active-EAE和Th1-EAE的发病程度。与此相反，在Th17-EAE小鼠中，NG2⁺ 胶质细胞能够抑制EAE的发生。这些结果提示NG2⁺胶质细胞在不同诱导方式EAE发生中的作用是不同的，因此在治疗方法上也应该区别对待。这一结果将帮助多发性硬化患者的治疗提供新的靶点。
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  IL-17对人结肠肠腺癌细胞株通透性及Gal-9表达的影响

  路瑶，刘静，贺欣，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 186-190.

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  为研究IL-17处理前后T84细胞单层的跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance，TER)及辣根过氧化物酶(horeradish peroxidase，HRP)通过率的变化，同时检测处理前后对T84细胞中半乳糖凝集素9(galectin 9，Gal-9)表达的影响，采用transwell共培养系统(随机分为2组)，分别为正常对照组、不同浓度IL-17处理组进行实验。IL-17处理2 h后测量各组TER，并计算相对TER、HRP通透率。采用ELISA方法检测各组T84细胞上清液中Gal-9表达量，并用免疫细胞化学方法检测各组T84细胞内Gal-9表达的变化。结果显示肠腔侧IL-17浓度不超过50 ng/mL时，不引起TER改变。当浓度大于50 ng/mL时，TER随着IL-17浓度的增加而下降(P < 0.05)。高浓度IL-17组较正常对照组及低浓度组，T84细胞上清液中Gal-9表达量明显降低(P < 0.05)。高浓度组T84细胞经免疫细胞化学染色后，呈棕褐色的部分较正常对照组和低浓度组明显减少。另外，上清液中Gal-9浓度与HRP流量之间呈负相关。由此说明，IL-17可造成T84细胞单层通透性增加及Gal-9表达量的减少。
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  过表达IDO可增强大鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制作用

  李贝贝，韩金秀，严丹，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 191-196.

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  探讨过表达IDO的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC)免疫抑制调节作用机制。通过慢病毒转染体系构建过表达IDO大鼠BMSC并加入基因开启剂。采用体外共培养方式共分12组，检测CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD274、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62、Treg、CD4、CD8表达；利用液相芯片检测IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-18、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的变化情况。结果显示各组与DC单独培养48 h后，共培养组中过表达IDO-BMSC+DC培养组中DC表达CD40、CD86、CD80、MHCII、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62是降低的，而CD274的表达是升高的，说明过表达IDO提高了BMSC对DC的免疫抑制作用；各组与T细胞单独培养48 h后，共培养组中过表达IDO-BMSC+T细胞培养组中T细胞中Treg数量是升高的，CD4⁺T细胞的变化无明显规律性，但CD8⁺T细胞是降低的，说明过表达IDO-BMSC可调节CD8⁺T细胞并可以促进Treg的表达；当将各组BMSC+DC+T细胞培养48 h后，可见：共培养组中悬浮细胞表达CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62是降低的，而CD274是升高的，再次说明过表达IDO提高了BMSC对DC的免疫抑制作用，而Treg数量增加，CD4⁺T细胞的变化无明显规律性，但CD8⁺T细胞是降低的，再次说明IDO能调节CD8⁺T细胞并可促进Treg的表达；各组培养48 h后的上清液进行液相芯片检测，可见IDO-BMSC+DC+T细胞培养组上清中IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IFN-γ、IL-18减低，IL-10、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3表达量升高。综上，过表达IDO的BMSC可以通过有效调节DC、T细胞水平及细胞因子分泌，从多免疫途径进行免疫抑制调节。
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  靶向大鼠C5aR基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定

  张泽英，高小龙，刘东旭

  现代免疫学. 2018, 38(3): 197-202.

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  构建靶向大鼠C5aR基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体，验证C5aR蛋白的功能，为后续进一步研究C5aR在免疫治疗中的作用奠定基础。具体方法是根据基因库提供的大鼠C5aR mRNA核苷酸序列(序列号:NM_053619)，设计并合成短发夹结构的互补DNA序列，克隆到经BamHI和EcoR I双酶切的线性化质粒pLVX-shRNA，构建重组质粒，并予以DNA测序鉴定。重组干扰质粒构建成功后，通过脂质体2000转染大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E，LPS处理后收集细胞，采用荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测干扰质粒对C5aR基因的表达抑制效应。通过尾静脉高压注射技术将重组干扰质粒导入Wistar大鼠肾脏，采用腹腔注射LPS方法复制脓毒血症急性肾损伤模型，大鼠随机分为正常对照组、LPS处理组、LPS+C5aR shRNA转染组，采用ELISA方法检测血清中Cr、BUN以及TNF-α、IL-6等炎性因子的含量。结果显示构建的shRNA序列经DNA测序证实与设计序列完全一致，重组质粒构建成功。转染C5aR shRNA后，NRK-52E细胞中C5aR mRNA和C5aR蛋白表达水平显著下降(P < 0.05)。该重组干扰质粒能有效抑制C5aR基因的表达，能显著抑制由LPS诱导的TNF-α、IL-6等炎性因子的释放，改善大鼠肾脏功能，对LPS诱导的肾脓毒血症损伤具有明显保护作用。
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  过敏性哮喘患者外周血CXCR5(+)CD4(+)T细胞的变化及其细胞因子表达研究

  龚芳，黄璇，朱婕，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 203-209.

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  本研究旨在探讨过敏性哮喘患者外周血CXCR5⁺CD4⁺T细胞数量、表型变化及其细胞因子的分泌特征。选取25例过敏性哮喘患者、25例非过敏性哮喘患者及27例性别和年龄相匹配的健康对照作为研究对象，流式细胞术检测外周血中CXCR5⁺CD4⁺T细胞数量及表型，胞内细胞因子染色方法检测细胞因子分泌情况。结果显示过敏性哮喘和非过敏性哮喘组外周血CXCR5⁺CD4⁺T细胞比例均高于健康组[（19.24±5.39） vs （8.24±1.68），P < 0.01；（17.79±4.01） vs （8.24±1.68）, P < 0.01]，而患病两组间无明显差异（P > 0.05）。患病两组患者外周血CXCR5⁺CD4⁺T细胞表面PD-1[（15.82±2.71） vs （7.64±1.87）, P < 0.01;（14.28±3.68） vs （7.64±1.87）, P < 0.01]、ICOS[（9.82±2.27） vs （4.98±1.76）, P < 0.01; （10.53±2.08） vs （4.98±1.76）, P < 0.01]表达均高于健康组，而患病两组间差异无统计学意义（P > 0.05）。患病两组CXCR5⁺CD4⁺T细胞胞内IL-21的表达均显著高于正常对照组（P < 0.01）。而CXCR5⁺CD4⁺T细胞胞内IL-4仅在过敏性哮喘患者中高表达（P < 0.01）。CXCR5⁺CD4⁺T细胞胞内IL-17、IFN-γ的表达在三组之间无差异（P > 0.05）。过敏组哮喘患者IL-4⁺CXCR5⁺CD4⁺T细胞、IL-21⁺CXCR5⁺CD4⁺T细胞比例与血清总IgE水平呈正相关（r = 0.652, P = 0.003；r = 0.523, P = 0.021）。研究结果表明过敏性哮喘患者外周血CXCR5⁺CD4⁺T细胞数量、表型及其细胞因子表达存在异常，可能参与过敏性哮喘免疫发病机制。
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  雷藤舒(LLDT-8)通过提高MEKK2蛋白表达调控胶原诱导性关节炎小鼠Treg/Th17平衡

  海亚美，周新朋，林婷婷，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 210-216.

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  为研究雷藤舒(LLDT-8)通过提高MAPK信号通路中MEKK2蛋白的表达，调控脾脏淋巴细胞中Treg/Th17比例，探索治疗CIA小鼠免疫作用机制。采用鸡II型胶原诱导小鼠关节炎模型，随机分为N组、CIA组、LLDT-8组、HE染色比较各组小鼠关节病理损伤程度，Masson染色观察各组胶原组织增生情况，应用流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中Treg/Th17比例；RT-PCR检测相关转录因子和炎性因子Foxp3、ROR-γt、IL-17A mRNA表达量；检测脾脏淋巴细胞中MEKK2蛋白和基因表达水平。结果显示，LLDT-8治疗可以减轻关节炎小鼠的关节病变严重程度、减少软骨表面及骨关节处胶原纤维增生。与N组比较，CIA组小鼠脾脏淋巴细胞中Treg比例降低，Th17比例升高(P < 0.01)；LLDT-8治疗后能显著提高Treg比例(P < 0.01)，降低Th17比例(P < 0.05)；CIA组脾脏淋巴细胞中MEKK2蛋白和基因表达量较正常组降低(P < 0.01)，LLDT-8治疗后能显著提高MEKK2的蛋白和基因表达量(P < 0.01)。由此，该研究提示MEKK2蛋白在CIA模型的发病中起着重要的作用，LLDT-8可能通过提高MEKK2蛋白的表达，影响Treg/Th17比例而发挥治疗RA的作用。
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  免疫调控受体PD-1和TIGIT在HIV感染者/HIV患者CD3(+)CD4(-)T细胞表达研究

  刘婷婷，尹晓婉，张子宁，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 217-222.

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  深入了解免疫调控受体程序性死亡分子1(programmed death 1，PD-1)和T细胞免疫球蛋白及免疫酪氨酸样抑制基序(T cell immunoglobulin and ITIM domain，TIGIT)在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染者/HIV患者外周血CD3⁺CD4^-T细胞的表达情况及其与疾病进展的关系。用流式细胞仪检测24例未治疗的HIV感染者/HIV患者外周血CD3⁺CD4^-T细胞表面PD-1和TIGIT的表达百分比、CD4⁺T细胞绝对值计数，实时荧光定量PCR检测HIV病毒载量，并与20例HIV抗体阴性者表达情况比较(HIV-negative normal control，NC)。结果发现HIV感染者/HIV患者CD3⁺CD4^-T细胞表面TIGIT受体表达百分数较健康对照组明显增高(P < 0.000 1)，与CD4⁺T细胞绝对计数呈负相关(r=-0.450 4, P=0.027 1)，与病毒载量呈正相关(r=0.621 4, P=0.001 2)；HIV感染者CD3⁺CD4^-T细胞PD-1受体表达百分数较健康对照组明显增高(P < 0.000 1)，与CD4⁺T细胞绝对计数呈负相关(r=-0.455, P =0.0255)；PD-1和TIGIT共表达的CD3⁺CD4^-T细胞百分数在HIV感染者/HIV患者中表达明显增高(P < 0.000 1)。HIV感染机体后，CD3⁺CD4^-T细胞PD-1受体和TIGIT受体表达百分数均明显增高，且与HIV疾病进展密切相关。
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  新疆黑蜂胶对结肠癌模型大鼠T细胞的影响

  刘阿慧，顾丹今，张凯，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 223-227.

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  探讨新疆黑蜂胶对结肠癌大鼠模型中T细胞的影响及其作用机制。雄性Wistar大鼠55只，随机分为对照组、模型组、蜂胶预防组、蜂胶治疗组和5-FU组。采用N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)灌肠建立结肠癌大鼠模型。各治疗组给予相应药物治疗30 d，其中蜂胶预防组于造模初便给予蜂胶预防性灌胃。每周观察大鼠体质量变化，HE染色观察结肠癌组织病理学变化、ELISA检测血清细胞因子TGF-β和IL-6水平、流式细胞术检测脾脏T细胞亚群数量、RT-PCR检测脾脏组织中转录因子Foxp3及ROR-γt mRNA的表达水平。结果显示，与模型组相比蜂胶治疗组及5-FU组大鼠体质量显著增高(P < 0.05)；模型组Treg数量及其转录因子Foxp3的表达较对照组明显增高(P < 0.05)，蜂胶预防组及5-FU组Treg数量及其转录因子Foxp3的表达较模型组明显降低(P < 0.05)；模型组Th17及其转录因子ROR-γt的表达较对照组明显增高(P < 0.05)，5-FU组Th17数量及其转录因子ROR-γt的表达较模型组显著降低(P < 0.05)；模型组大鼠Th17/Treg比值较对照组明显降低，而5-FU组大鼠Th17/Treg比值较模型组显著升高。这提示新疆黑蜂胶具有预防和治疗结肠癌的作用，调节相关T细胞的功能及细胞因子的表达可能是其作用机制之一。
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  TLR7、TLR9激动剂对人外周血B细胞作用的研究

  龚若兰，吴静，陈同辛，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 228-236.

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  人B淋巴细胞被TLR7、TLR9配体刺激后，可被激活进行克隆性增殖，促进其行使免疫功能。本研究使用TLR7、TLR9激动剂刺激健康人PBMC。使用流式细胞术，用荧光素标记的CD19筛选出B细胞后，CFSE法测定B细胞增殖情况，Annexin V测定B细胞凋亡情况，并且测定B细胞表面CD80、CD86、CD40、HLA-DR表达和B细胞IgG、IgM分泌情况。结果表明，TLR7、TLR9激动剂能显著刺激B细胞增殖、表面CD80、CD86、CD40和HLA-DR的表达上调以及刺激B细胞分泌IgM。不仅如此，TLR9激动剂还能降低B细胞早期凋亡并且刺激IgG分泌增加，而TLR7激动剂在上述方面作用却不显著。TLR9信号通路在刺激B细胞增殖、降低其早期凋亡、刺激其CD80上调以及IgG分泌方面显著强于TLR7。课题组需要进一步研究以探寻TLR9与TLR7在人B细胞内受体表达和信号转导通路的区别，为TLR通路缺陷相关疾病的发病机制和治疗研究提供理论依据。
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  IL-38、IL-22和IL-17与乳腺癌发展的相关性研究

  张黎，姜姗，刘淼，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 237-242.

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  探讨IL-38、IL-22和IL-17对乳腺癌发展的影响。收集34例乳腺癌患者手术前和手术后血液及27例体检健康女性血液，检测血清中的IL-38、IL-22和IL-17水平，对术前血清IL-38与IL-22和IL-17进行相关性分析并分析IL-38与乳腺癌临床病理参数之间的关系。采用不同浓度IL-38、IL-22和IL-17处理人乳腺癌MCF-7细胞，测定其细胞活力。随后分为对照组、IL-38组、IL-38+IL-22组、IL-38+IL-17组和IL-38+IL-22+IL-17组，检测其细胞活力、凋亡情况，并采用RT-PCR检测各组PCNA、Bax和Bcl-2的mRNA表达量。结果显示患者术前血清IL-38水平显著低于对照组，术后升高，与术前相比差异有统计学意义。患者术前血清IL-22和IL-17水平显著高于健康女性，术后血清IL-22和IL-17水平显著低于术前患者。患者术前血清IL-38浓度与血清IL-22和IL-17浓度均成负相关(r=-0.445, P=0.008; r=-0.498, P=0.003)。术前血清IL-38浓度与患者年龄无关，与肿瘤直径、组织学分级和淋巴结转移有关。由此表明IL-38可能与IL-17和IL-22在乳腺癌的进程中发挥相反的作用。进一步的细胞结果表明，IL-38抑制MCF-7细胞活力，促进凋亡，而IL-22和IL-17发挥相反作用。RT-PCR结果表明，IL-38促进Bax mRNA的表达，抑制PCNA和Bcl-2 mRNA的表达，而IL-22和IL-17发挥相反的作用。本研究表明IL-38抑制乳腺癌的发展，IL-22和IL-17促进乳腺癌的发展。
综述
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  TLR4基因多态性与相关骨科疾病的研究进展

  谢克恭，农峰，梁俊卿，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 243-246.

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  疾病的发生与发展是一个受多种因素综合影响的结果。其发病机制除了与环境因素有关外，还与遗传因素有着密切联系。其中，基因多态性是遗传因素中的重要组成部分，参与疾病的发生过程。TLR4是TLR家族中最为人们所了解的成员之一。研究显示，TLR4参与多种疾病的演变过程，其基因多态性与疾病的易感性存在相关性。目前，尽管TLR4基因多态性在骨科方面的研究尚处于初步阶段，但已取得一定的进步，均是致力于骨科疾病的预防、早期诊断、治疗及判断预后。因此，本文就近年来关于TLR4基因多态性在相关骨科疾病方面的研究作一综述。
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  非小细胞肺癌免疫治疗的策略与展望

  王莉新，吴文斌，朱诗国

  现代免疫学. 2018, 38(3): 247-251.

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  在中国，肺癌是致死率最高的癌症。其中，非小细胞肺癌约占据肺癌患者的85%，约75%的患者发现时已处于进展期或已发生转移。目前，传统肿瘤疗法(手术、化疗、放疗)对非小细胞肺癌的治疗效果欠佳，不能有效改善患者生存期及生活质量。近年来随着分子生物学及免疫学的发展，免疫疗法已逐渐应用于非小细胞肺癌的治疗，且疗效显著。非小细胞肺癌的免疫疗法主要包括免疫检查点抑制剂、过继免疫细胞疗法、肿瘤疫苗等。本文主要就这些常见的非小细胞肺癌免疫治疗策略作一综述，期望为临床上非小细胞肺癌的有效治疗提供依据。
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  无菌小鼠免疫系统研究概况和进展

  薛淮娟，马龙，秦欢，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 252-256.

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  近年来，无菌小鼠在研究肠道菌群与成人大脑结构及行为异常的相关疾病、对2型糖尿病发病的影响、对疟原虫感染的调控等研究中做出了重要贡献。无菌小鼠独特的无菌状态，为人类在探究生命体生理、病理反应时去除了其余的影响因素，是一个非常有价值的研究工具。无菌小鼠由于自身免疫系统发育的迟缓导致相应的免疫器官、免疫细胞的功能和数量明显异于正常小鼠，故本文将对无菌小鼠的免疫系统研究进展作进一步的概述。
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  免疫炎症反应在对比剂急性肾损伤发病机制中的作用

  王明秋，翟文豪，朱子豪，等

  现代免疫学. 2018, 38(3): 257-260.

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  对比剂急性肾损伤(contrast-induced acute kidney injury, CI-AKI)是医院获得性急性肾损伤的常见原因之一。对CIAKI发病机制的研究发现，免疫炎性细胞与介质可通过不同机制调控其功能和细胞因子的表达，在CI-AKI的发生和发展中起重要作用。深入研究肾脏固有细胞与免疫细胞及其因子在CI-AKI疾病中的作用机制将有助于发现新的临床防治靶点，为治疗CI-AKI提供新的理论依据。
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  PD-1/PD-L1阻断治疗及其疗效预测研究进展

  闵慜，吴霞

  现代免疫学. 2018, 38(3): 261-265.

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  肿瘤突变负荷是筛选PD-1/PD-L1阻断治疗中潜在受益患者的生物标志物，新生抗原高负荷肿瘤行PD-1/PD-L1阻断治疗能获得更好的疗效，本文介绍了PD-1/PD-L1阻断治疗及其疗效预测的研究进展。