2024年, 第44卷, 第6期　刊出日期：2024-11-30

  

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论著
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  红景天苷通过miR-26a-5p靶向调控JAG1/Notch3信号通路改善瘢痕疙瘩

  蔡翔, 邱百怡, 段垚, 王威, 何亚男

  现代免疫学. 2024, 44(6): 465-473.

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  为探讨红景天苷通过miR-26a-5p靶向调控JAG1/Notch3信号通路对瘢痕疙瘩改善作用的确切机制，自2019年10月至2021年1月，收集武汉市中医医院10例经组织病理学检查确诊为瘢痕疙瘩的患者样本为研究对象，记为瘢痕疙瘩组，并采集相邻正常皮肤组织，记为正常组。分离上述原代瘢痕疙瘩成纤维细胞，将传至4～8代的细胞分为对照组(正常培养)、红景天苷低剂量组(10 μmol/L红景天苷)、红景天苷中剂量组(20 μmol/L)、红景天苷高剂量组(40 μmol/L)、miR-NC组(40 μmol/L红景天苷+miR-NC)、miR-26a-5p inhibitor组(40 μmol/L红景天苷+ miR-26a-5p inhibitor)、sh-RNA组(40 μmol/L红景天苷+miR-26a-5p inhibitor+sh-RNA)和sh-JAG1组(40 μmol/L红景天苷+miR-26a-5p inhibitor+sh-JAG1)，各组细胞经转染后给予红景天苷或直接给予对应剂量的红景天苷处理24 h。qRT-PCR法检测成纤维细胞miR-26a-5p和JAG1的mRNA相对表达量；MTT法检测细胞的增殖活力；平板克隆实验检测细胞的克隆增殖能力；FACS检测细胞的凋亡情况；Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力；荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的靶向互作关系；Western blotting检测瘢痕组织增生相关蛋白的表达。结果显示，与正常组相比，瘢痕疙瘩组miR-26a-5p表达显著下降(P＜0.05)，JAG1表达显著升高(P＜0.05)。与0 μmol/L组相比，10、20、40、80和160 μmol/L 红景天苷呈浓度依赖性地抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞存活率(均P＜0.05)。为保证瘢痕疙瘩成纤维细胞具有一定的存活率，并保证红景天苷的作用效果，后续使用10、20和40 μmol/L浓度展开实验（经荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1存在结合序列）。与对照组相比，红景天苷低、中、高剂量组miR-26a-5p表达、细胞凋亡率均显著升高，JAG1表达、细胞克隆增殖数、迁移和侵袭数以及α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、JAG1和Notch3蛋白表达量均显著降低(均P＜0.05)；与红景天苷高剂量组和miR-NC组相比，miR-26a-5p inhibitor组miR-26a-5p表达量和细胞凋亡率显著降低，而JAG1表达、细胞克隆数、迁移和侵袭数以及α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、JAG1和Notch3蛋白表达量显著升高(均P＜0.05)；抑制JAG1表达可对细胞产生抑制增殖、迁移和侵袭作用，促进细胞凋亡。由此，瘢痕疙瘩组织中miR-26a-5p表达下调，JAG1表达上调，红景天苷可通过上调miR-26a-5p表达靶向抑制JAG1/Notch3信号通路，抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡，达到改善瘢痕疙瘩的效果。
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  应用髓源性抑制细胞来源外泌体治疗糖尿病肾病小鼠

  梁丽, 张一珂, 邵烁鋆, 谢劲松, 朱栋炜

  现代免疫学. 2024, 44(6): 474-481.

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  已知糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）与免疫应答的过度激活有关，而髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell, MDSC）来源的外泌体（exosome, EX）展现出强大的免疫抑制能力，研究探讨MDSC-EX对DN模型小鼠病情的影响。经高脂饮食和链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）注射构建DN小鼠模型，磁珠分选DN小鼠脾脏中MDSC的两个亚群——多形核样MDSC（polymorphonuclear MDSC, PMN-MDSC）和单核细胞样MDSC（monocytic MDSC, MO-MDSC）。培养PMN-MDSCs和MO-MDSCs并收集上清液，制备EX，FACS检测EX对CD3⁺T细胞增殖的抑制作用。尾静脉注射PMN-MDSC-EX或MO-MDSC-EX至DN模型小鼠，观察处理对模型小鼠空腹血糖（fasting blood glucose, FBG）、体质量（body weight, BW）、24 h尿液总蛋白定量（total protein in urine within 24 hours, TPU）、血清尿素氮（urea nitrogen in serum, UNS）、血清肌酐（creatinine in serum, CS）以及肾小球滤过率（glomerular filtration rate, GFR）的影响。显微镜下观察各组肾脏H-E染色情况，Western blotting检测肾脏组织纤维连接蛋白（fibronectin）、Ⅳ型胶原（collagen type Ⅳ, collagen Ⅳ）和α平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle actin, α-SMA）的表达情况。实验成功构建DN模型并制得PMN-MDSC-EX和MO-MDSC-EX。相较MO-MDSC-EX，PMN-MDSC-EX可更显著地抑制CD3⁺T细胞增殖（P＜0.05）。相较MO-MDSC-EX，PMN-MDSC-EX显著降低DN小鼠FBG、TPU、UNS和CS水平，增加模型鼠BW和GFR（均P＜0.05）。PMN-MDSC-EX和MO-MDSC-EX干预后DN小鼠肾脏组织损伤明显减轻，相较MO-MDSC-EX，PMN-MDSC-EX抑制DN模型小鼠肾小球硬化的作用更为显著（均P＜0.05）。由此，相较MO-MDSC-EX，PMN-MDSC-EX具有更强的缓解DN小鼠病情的作用，提示PMN-MDSC-EX或可成为治疗DN的新途径。
  
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  益母草碱对过敏性紫癜肾炎小鼠的肾保护作用及对Th1/Th2平衡和免疫功能的影响

  员丽, 任献青, 张卫星

  现代免疫学. 2024, 44(6): 482-487.

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  为探讨益母草碱(leonurine, LEO)对过敏性紫癜肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis, HSPN)的影响，将小鼠分为空白对照组、模型组、LEO低剂量［25 mg/(kg·d)］组、LEO中剂量［50 mg/(kg·d)］组、LEO高剂量［100 mg/(kg·d)］组，用考马斯亮蓝法检测24 h尿白蛋白(albumin, Alb)水平并计数尿红细胞；全自动生化分析仪检测血清肌酐(creatinine, Cr)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)水平；免疫荧光染色检测肾组织IgA沉积情况；H-E染色观察肾脏组织病理学变化； ELISA检测血清IL-4、IL-10、IFN-γ及TNF-α水平；聚乙二醇沉淀比浊法检测血清循环免疫复合物水平；流式细胞术测定外周血Th1/Th2比值。结果显示，与空白对照组比较，模型组小鼠24 h尿Alb水平，尿红细胞数，血清Cr、BUN、IL-4、IL-10、循环免疫复合物水平显著升高，血清IFN-γ、TNF-α水平及外周血Th1/Th2比值显著降低(P<0.05)；与模型组比较，LEO低、中、高剂量组小鼠24 h尿Alb水平，尿红细胞数, 血清Cr、BUN、IL-4、IL-10、循环免疫复合物水平显著降低，血清IFN-γ、TNF-α水平及外周血Th1/Th2比值显著升高(P<0.05)；LEO作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。该研究提示，LEO可减轻HSPN小鼠肾组织损伤，改善肾功能，发挥肾保护作用，其作用机制可能与促进Th1/Th2平衡和促进机体免疫功能恢复正常有关。
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  基于TLR4/NF-κB/TGF-β1信号通路探讨蛭龙通络胶囊在阿霉素肾病大鼠抗肾纤维化中的作用

  李旭萍, 马鸿斌, 马海兰

  现代免疫学. 2024, 44(6): 488-493.

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  为探讨蛭龙通络胶囊抑制阿霉素（adriamycin, ADR）肾病大鼠肾纤维化的作用机制，右肾摘除及多次尾静脉注射3 mg/kg ADR构建肾纤维化大鼠模型，建模成功后将实验鼠分为模型组和蛭龙通络胶囊组、蛭龙通络胶囊+激活剂组，另选未处理大鼠为空白对照组。蛭龙通络胶囊组大鼠给予蛭龙通络胶囊混悬液灌胃，蛭龙通络胶囊+激活剂组大鼠给予蛭龙通络胶囊混悬液灌胃和LPS（5 mg/kg）腹腔注射，空白对照组、模型组大鼠给予等量生理盐水处理，给药共持续8周。观察各组大鼠一般情况并记录体质量（body weight, BW）变化，采用尿蛋白定量试剂盒以及ELISA检测试剂盒检测24 h尿蛋白（24 h urine protein, 24 h UPO）、肌酐（creatinine, Cr）和血尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）含量；断头处理大鼠后取肾组织，制备切片行马松（Masson）染色观察肾组织纤维化情况；qRT-PCR法和免疫组化染色检测各组大鼠肾组织中TLR4、NF-κB和TGF-β1的mRNA及蛋白表达水平。结果显示，与空白对照组比较，模型组大鼠BW下降，肾组织胶原纤维面积占比(collagen proportionate area, CPA)、24 h UPO、Cr、BUN水平升高，TLR4、NF-κB、TGF-β1的mRNA及蛋白表达量显著升高（均P＜0.05）。与模型组比较，蛭龙通络胶囊组大鼠BW增加，CPA、24 h UPO、Cr、BUN水平降低，TLR4、NF-κB、TGF-β1的mRNA及蛋白表达量显著降低（均P＜0.05）。与蛭龙通络胶囊组比较，蛭龙通络胶囊+激活剂组大鼠BW显著下降，CPA、24 h UPO、Cr和BUN水平升高，TLR4、NF-κB、TGF-β1的mRNA及蛋白表达量显著升高（均P＜0.05）。由此，蛭龙通络胶囊或通过抑制TLR4/NF-κB/TGF-β1信号通路表达，改善肾病大鼠肾组织纤维化，减轻肾损伤。
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  D-柠檬烯抑制NF-κB通路介导COPD小鼠的炎症和免疫反应

  张军, 舒婷婷, 李汉永, 罗卫东, 范彦博, 刘静, 吴迪, 李旭成, 崔金涛

  现代免疫学. 2024, 44(6): 494-499.

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  为探讨泻肺清肝饮活性成分D-柠檬烯对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)小鼠炎症和免疫反应的影响及其机制，将36只6周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组：对照组、模型组和D-柠檬烯组，每组12只。通过LPS和烟熏诱导COPD小鼠模型，D-柠檬烯组小鼠从造模第2 天开始每天按照100 mg/kg的剂量给予腹腔注射D-柠檬烯，持续给药至第28天。观察各组小鼠的毛发、行动以及精神状态，并记录小鼠体质量，H-E染色观察小鼠肺组织病理变化，Western blotting检测小鼠肺组织中NF-κB、p-NF-κB蛋白的表达，ELISA检测血清以及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10的水平，FACS检测外周血中Th17/Treg比值。结果显示，与对照组比较，模型组小鼠体质量减轻，精神萎靡颓废，毛色暗淡，脱毛，活动度降低；肺泡结构紊乱，支气管壁上皮增生，肺组织周围有大量炎症细胞浸润；肺组织中p-NF-κB蛋白表达水平，血清及BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β水平和外周血中Th17/Treg比值均显著升高(P<0.01)，血清及BALF中IL-10水平显著降低(P<0.01)。D-柠檬烯用药后显著逆转了上述变化(P<0.01)。该研究提示，D-柠檬烯通过抑制NF-κB通路来恢复Th17/Treg平衡，降低炎性因子的表达，对COPD小鼠具有较好的治疗效果。
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  栀子苷减轻乙型脑炎病毒诱导的认知功能受损及其机制探讨

  金安松, 钟莲梅, 徐春燕, 马瑞芳, 唐曙光, 马智萍

  现代免疫学. 2024, 44(6): 500-505.

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  为了探讨栀子苷(geniposide, GE)对乙型日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)诱导的认知障碍相关神经症状的潜在保护作用及其机制，为乙型日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)的治疗提供新思路，将80只雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、GE组、JEV感染组及GE治疗组，每组20只。统计各组小鼠14 d存活率；采用莫里斯水迷宫试验检测各组小鼠认知记忆能力；免疫荧光法检测海马区脑组织JEV感染情况；ELISA检测海马区脑组织炎症损伤和氧化应激水平；Western blotting检测自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5, Atg5)、B淋巴细胞瘤 2(B-cell lymphoma 2, Bcl-2)、Bcl2相关X蛋白(Bcl2-associated X protein, Bax)、p62及微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3, LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达。结果显示，GE治疗能够提高JEV模型小鼠的14 d存活率；与JEV感染组比较，GE治疗组小鼠的逃生潜伏期显著缩短，平台象限滞留时间比和穿越平台次数显著增加(P＜0.01)。与JEV感染组比较，GE治疗组小鼠的JEV阳性细胞百分比显著降低(P＜0.01)。与JEV感染组比较，GE治疗组小鼠IL-1β、TNF-α、活性氧(reactive oxygen species, ROS)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)的表达水平显著降低(P＜0.01)，Atg5、Bax及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平显著降低(P＜0.01)，p62和Bcl-2表达水平显著升高(P＜0.01)。该研究提示，GE可抑制JEV诱导的小鼠死亡和学习认知功能障碍，该作用可能是通过减少氧化应激反应和炎症反应、改善自噬的过度激活而实现的。
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  SMAD4突变型结直肠癌患者基因突变及肿瘤免疫微环境特征分析

  姬清华, 徐伟, 张虎山, 马俊蕊, 黄飞, 伍龙, 郭伟, 张汝一, 梁正子

  现代免疫学. 2024, 44(6): 506-512.

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  为探讨贵州地区结直肠癌患者人母亲DDP同源物4 (mothers against decapentaplegic homolog 4, SMAD4)突变及肿瘤免疫微环境特征，采用二代测序(next generation sequencing, NGS)、多重免疫荧光及免疫组化等技术，回顾性分析了150例贵州地区结直肠癌患者的SMAD4突变数据及其中8例患者的肿瘤免疫微环境数据。结果显示，在患者群中，有22.00%的患者出现SMAD4突变，最主要的突变形式为非同义突变(66.67%)，与SMAD4共突变最主要的基因为Kirsten大鼠肉毒病毒原癌基因同源基因(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homologue, KRAS, 51.52%)。肿瘤突变负荷(tumor mutational burden, TMB)和PD-L1表达水平在 SMAD4突变与否的患者中差异无统计学意义(P>0.05)。微卫星高度不稳定性(microsatellite instability-high, MSI-H) 的比例在SMAD4突变与否的患者中差异有统计学意义(P=0.014)，但MSI-H仅占6.06%(4/66)。相比SMAD4野生型患者，SMAD4突变型患者肿瘤组织中具有更多的M2型巨噬细胞(P=0.038)。该研究提示，SMAD4突变患者M2型巨噬细胞在肿瘤中的浸润，可能导致了这类患者更差的预后以及对化疗药物的耐药。
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  人骨髓间充质干细胞在体外通过BDNF/TrKB通路抑制神经细胞凋亡

  马临庆, 张立梅, 任丽艳, 孙璐, 崔俊一, 周丽华

  现代免疫学. 2024, 44(6): 513-520.

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  该研究探讨人骨髓间充质干细胞(human bone mesenchymal stem cells, hBMSC)在体外抑制神经细胞凋亡的机制。使用H2O2作为凋亡诱导剂，诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)或原代培养的小鼠神经细胞产生细胞凋亡，通过hBMSC与SH-SY5Y细胞或原代培养的小鼠神经细胞共培养，观察hBMSC的抗氧化作用。利用特异性酪氨酸激酶受体B(tyrosine receptor kinase B, TrkB)抑制剂阻断脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)/TrKB通路，观察hBMSC抗氧化作用的变化。H2O2诱导SH-SY5Y细胞产生浓度依赖性和时间依赖性细胞凋亡，hBMSC与SH-SY5Y细胞或原代培养的小鼠神经细胞进行共培养，可以抑制细胞凋亡。TrkB抑制剂阻断BDNF/TrKB通路，部分降低了hBMSC抑制细胞凋亡的作用。研究结果显示hBMSC在体外通过BDNF/TrKB通路发挥其抑制神经细胞凋亡的作用。
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  HLA Ⅱ类基因8个单核苷酸多态性与慢性HBV感染的相关性研究

  孔凡辉, 苏明宽, 杨虹, 吴水清, 郭建峰, 黄建成

  现代免疫学. 2024, 44(6): 521-525.

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  为了验证HLA Ⅱ类基因是慢性HBV感染相关的遗传易感基因，深入了解不同人群慢性HBV感染的分子机制，从HLA Ⅱ类基因区域筛选出8个具有代表性的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNP)，重新分析所选SNP与慢性HBV感染的相关性。采用以医院为基础的病例对照研究，以183例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者为病例组，196例HBV自限性感染者为对照组。采用SNaPshot技术对8个SNP进行等位基因分型。对照组与病例组比较，在显性模型下，rs9276370(GG+GT vs TT: P = 0.013)、rs7756516(CC+CT vs TT: P = 0.023)、rs7453920(AA+AG vs GG: P = 0.003)、rs3077(AA+AG vs GG: P = 0.028)、rs9277535(AA+AG vs GG: P = 0.012)和rs9366816(TT+TC vs CC: P = 0.014)多态性均与HBV自限性感染呈正相关, rs378352(AA+AG vs GG: P = 0.024)则是CHB的危险因素。单倍型分析显示，HLA-DQ基因的rs9276370、rs7756516和rs7453920可以构成TTG和GCA 2种单倍型，TTG单倍型与CHB风险呈正相关，而GCA单倍型具有很强的HBV感染后清除作用。因此，该研究认为HLA Ⅱ基因多态性与慢性HBV感染存在相关性。
综述
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  TREM2在阿尔茨海默病中介导免疫调节的研究进展

  曹钧钲, 宋军营, 王瑞芳

  现代免疫学. 2024, 44(6): 526-529.

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  老年人阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)发病率极高，目前其最为熟知的病理改变为高度磷酸化的tau蛋白缠结及β淀粉样蛋白(amyloid β-protein, Aβ)沉积。研究发现，免疫炎症反应在AD发病过程中同样起着重要作用，而小胶质细胞是神经免疫应答过程中的主要参与者。在大脑中，髓系细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2, TREM2)主要表达于小胶质细胞中，其除调控小胶质细胞代谢、生存、吞噬和增殖功能，还可调节小胶质细胞由M1型向M2型转变。近年来关于TREM2调控免疫炎症反应改善AD病理的研究越来越多，该文就TREM2和小胶质细胞对中枢神经系统及AD病理变化的影响展开综述。
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  单链抗体的新研究进展及其在医学中的应用

  焦子琛, 王子豪, 匡宇竹, 张林波, 张文慧, 付璐

  现代免疫学. 2024, 44(6): 530-535.

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  利用基因工程技术改造抗体能使人们成功获得各种新型的小分子抗体。其中，单链抗体具有高特异性、高亲和力、高组织渗透性、稳定性优异、低免疫原性、易制备及可大规模生产等优点。单链抗体目前已被广泛应用于药物开发、疾病治疗等领域。该文综述了单链抗体的新研究进展及其在医学中的应用。
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  双阴性T细胞：通用型细胞药物研发进展与趋势

  闫琼宇, 路丽明, 杨黎明

  现代免疫学. 2024, 44(6): 536-541.

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  近年来以PD-1抗体和嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cells, CAR-T)为代表的免疫治疗使肿瘤晚期患者获得显著疗效，肿瘤免疫治疗成为肿瘤治疗的热点。自体CAR-T在血液恶性肿瘤和一些自身免疫性疾病的治疗中展现出可喜疗效, 但由于其价格昂贵、制备耗时、临床使用不便等局限，限制了CAR-T产品的临床应用。通用型细胞可以弥补这些缺陷。双阴性T细胞 (double negative T cells, DNT) 存在于人外周血中，属成熟T细胞的一个亚型，细胞表面表达CD3与αβ或γδ TCR分子，但不表达CD4、CD8、CD56分子，也不结合恒定型自然杀伤T细胞特异性α-半乳糖神经酰胺（α-galactosyceramide, αGalCer)加载的CD1d四聚物，占正常人外周血T细胞约1%~10%。异体来源的DNT无需基因编辑，天然不引起移植物抗宿主病和宿主抗移植物反应，具备作为通用型细胞治疗产品的特征。DNT可在体外大量扩增，生产工艺成熟可控，可提前制备存储在液氮罐备用，满足作为药物属性的通用型细胞产品要求。DNT是制备通用型CAR-DNT产品的良好载体细胞，可以发挥DNT天然多靶点叠加CAR特异靶点的多重杀瘤活性。该综述将重点介绍DNT的发现、杀瘤机制及其在临床研究中的进展，为开发通用型免疫细胞治疗产品提供全新的视角。
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  肠道菌群经免疫系统介导骨质疏松的研究进展

  雷佩佩, 密田, 杨桂玲, 王秋灵

  现代免疫学. 2024, 44(6): 542-547.

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  肠道菌群是寄生于肠道中的共生细菌，具有很多重要的功能，包括调节宿主的新陈代谢和机体免疫稳态。近年来，有充分的证据表明肠道菌群可以调节骨量，主要是通过其代谢产物、与机体内分泌系统和免疫系统的相互作用介导的。该文结合国内外最新的相关文献报道就肠道菌群如何通过免疫系统影响机体骨代谢作一综述。
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  年龄相关的B细胞的基础与临床研究进展

  肖易沁文, 陈紫薇, 李菲, 王诗轩

  现代免疫学. 2024, 44(6): 548-554.

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  年龄相关的B细胞（age-associated B cells, ABC）是近年发现的一种新型B细胞亚群，随年龄增长在脾脏中不断积累。这些细胞有独特的细胞表型和转录特征。ABC高表达髓系标记CD11c和转录因子T-bet，在Th1细胞因子和TLR7和（或）TLR9的刺激下分化增殖，具有分化为浆细胞产生抗体、分泌细胞因子、呈递抗原等功能。ABC在免疫衰老、自身免疫病等方面发挥重要作用，该文旨在介绍ABC的表型特征、起源、解剖分布、分化调控机制与功能，阐明其在免疫衰老和自身免疫病中的作用，有助于为临床治疗提供新靶点。
简讯
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  《现代免疫学》2024年第44卷第1～6期总目次

  《现代免疫学》编辑部

  现代免疫学. 2024, 44(6): 554.

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