2020年, 第40卷, 第3期　刊出日期：2020-05-30

  

• 全选
  |

论著
• Select
  miR-186上调Dicer1抑制结肠癌侵袭转移的作用机制

  樊明湖，陈保华，车河龙，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 177-186.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  为探讨miR-186通过Dicer1影响结肠癌细胞侵袭转移及其作用机制，RT-qPCR检测miR-186在结肠癌组织及正常癌旁组织、人结肠癌细胞及正常人肠上皮细胞HIEC中的表达；荧光显微镜观察稳定过表达/下调miR-186细胞系GFP荧光并采用RT-qPCR检测miR-186表达效率；Transwell及划痕实验检测miR-186对结肠癌细胞SW620和HT29侵袭、迁移能力的影响；免疫荧光法检测上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）相关分子N-cadherin表达；生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-186和Dicer1的靶向关系；免疫组织化学法检测Dicer1在结肠癌组织及正常癌旁组织中的表达；Western blotting检测Dicer1在各细胞株中的表达。结果显示，肿瘤组织中miR-186的表达水平显著低于正常癌旁组织（P ＜ 0.05）；miR-186在肿瘤细胞中的表达水平显著低于HIEC（P ＜ 0.05）。转染过表达/下调miR-186慢病毒阳性质粒及阴性对照的SW620和HT29细胞均出现大量绿色荧光；RT-qPCR显示稳定过表达细胞SW620-mimic-miR-186中miR-186水平显著升高，HT29-inhibitor-miR-186中miR-186水平显著下降，分别与SW620和SW620-mimic-NC、HT29和HT29-inhibitor-NC相比差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。过表达miR-186能显著降低SW620的侵袭迁移能力，同时抑制N-cadherin水平，而下调miR-186能显著增加HT29的侵袭迁移能力。经www.microRNA.org网站预测发现miR-186和Dicer1有互补结合序列，双荧光素酶报告实验证实两者的靶向结合关系。SW620中Dicer1表达水平显著低于HIEC（P ＜ 0.05）；稳定过表达细胞系SW620-mimic-miR-186中Dicer1表达水平明显升高，分别与SW620和SW620-mimic-NC相比差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。由此，miR-186通过靶向正调控Dicer1的表达降低N-cadherin水平从而抑制EMT进程，最终抑制结肠癌细胞的侵袭迁移能力。
• Select
  免疫分子B7-H3对人脐静脉内皮细胞功能的影响

  孙静，杨洁，吴萍萍，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 187-191.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  设计针对B7-H3 1041以及996位点的shRNA，构建相应慢病毒B7-H3 载体，研究其表达下调对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）生物学行为的影响。针对B7-H3 mRNA序列设计2对不同位点的shRNA，克隆连接至慢病毒载体中，与穿梭载体LV3共转染至人肾上皮细胞系293T细胞并包装病毒，逐孔稀释法测定病毒滴度。用聚凝胺浸染HUVEC细胞株，real-time PCR、FACS测定靶细胞B7-H3 及其蛋白表达抑制情况，CCK-8法检测细胞增殖能力，Transwell实验分析其迁移能力。结果显示，慢病毒载体可抑制B7-H3及其蛋白的表达，抑制率超过84.7%；CCK-8实验显示B7-H3表达降低后HUVEC的增殖和迁移能力明显降低。以上发现可为进一步研究该分子的生物学功能及其在RA中的作用奠定基础。
• Select
  杨絮蛋白的组分分析及其T、B细胞表位预测

  郭伟，湛孝东，黄月娥，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 192-196.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  摘要：杨絮是引起过敏性疾病的重要气传变应原之一。为了分析杨絮的蛋白组分并预测其T、B细胞表位，本研究采用有机溶媒法提取杨絮总蛋白，二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）试剂盒检测蛋白浓度。胰酶酶解总蛋白，经高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）分级、液相色谱-质谱进行组分分析以及质谱质控鉴定；生物信息学方法在线预测不同组分中的T细胞和线性B细胞表位。结果显示，杨絮蛋白总浓度为5.53 μg/μL，经酶解及液相色谱-质谱进行组分分析共获得22 023个肽段，质谱质控显示所获肽段的质量偏移（mass error）＜10 ppm，肽段长度主要分布在8～20个氨基酸残基之间；生物信息学在线预测结果表明，所得肽段含16个高亲和力T细胞表位、2 300个中等亲和力的T细胞表位以及10个线性B细胞表位。该研究结果表明，杨絮的蛋白组分含有具有潜在诱发Ⅰ型过敏性疾病的T和B细胞表位。
• Select
  Twist对TNF-α作用后乳腺癌细胞侵袭及上皮间质转化的影响

  宋兴丽，张燕松，杨丽，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 197-202.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  RNA干扰技术抑制Twist在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达，观察其沉默对TNF-α作用后乳腺癌细胞侵袭及上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的影响。以乳腺癌细胞MDA-MB-231为空白对照，shRNA-NC空载体为阴性对照，构建Twist沉默表达载体，转染乳腺癌细胞MDA-MB-231，qRT-PCR和Western blotting检测转染细胞中Twist mRNA及蛋白质表达水平。建立Twist沉默表达的乳腺癌细胞模型后，用TNF-α分别处理对照组及转染后的乳腺癌细胞，Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力，Western blotting检测细胞EMT相关蛋白波形蛋白（Vimentin）、上皮钙黏附素(E-cadherin)和转移相关蛋白基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2， MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达。结果显示，下调Twist的乳腺癌细胞经TNF-α处理后，细胞侵袭和迁移能力降低，Vimentin表达减少，E-cadherin表达增加，细胞中MMP-2、MMP-9表达减少，与空白对照及TNF-α作用后的阴性对照相比，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。因此，下调Twist可降低TNF-α诱导的乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力，抑制其EMT。
• Select
  层黏素受体靶向RNA干扰在削弱直肠癌免疫逃逸中的作用探讨

  王毅刚，王金艳，甄晓月

  现代免疫学. 2020, 40(3): 203-208.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  为探讨层黏素受体（laminin receptor，LNR）靶向RNA干扰在直肠癌免疫逃逸中的作用，将pGenesil-3-shLNR重组质粒转染SW480细胞，对比干扰组、对照组和空载组细胞中LNR mRNA和蛋白表达情况。建立SW480细胞与人Jurkat细胞Transwell小室旁分泌共培养模型，检测共培养48 h后SW480细胞和Jurkat细胞的凋亡率，并检测2种细胞Fas、FasL、Caspase-8 mRNA和蛋白表达情况。结果显示，重组质粒转染效率为（65.30±6.03）%。与对照组、空载组比较，干扰组LNR mRNA和蛋白相对表达量均较低（P ＜ 0.05）；SW480细胞凋亡率较高（P ＜ 0.05），Jurkat细胞凋亡率较低（P ＜ 0.05）；SW480细胞Fas、Caspase-8 mRNA和蛋白相对表达量均较高，FasL mRNA和蛋白相对表达量较低，Jurkat细胞Fas、Caspase-8 mRNA和蛋白相对表达量均较低，FasL mRNA和蛋白相对表达量较高（P ＜ 0.05）。对照组与空载组LNR mRNA及蛋白相对表达量，SW480细胞和Jurkat细胞凋亡率，SW480细胞和Jurkat细胞Fas、FasL、Caspase-8 mRNA及蛋白相对表达量比较，差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。以上结果提示LNR靶向RNA干扰可抑制直肠癌细胞中LNR表达，可能通过调节SW480细胞和Jurkat细胞中Fas/FasL信号通路使SW480细胞诱导Jurkat细胞凋亡率降低，同时增强Jurkat细胞杀伤SW480细胞能力，削弱直肠癌细胞的免疫逃逸能力。
• Select
  miR-129-5p靶向HMGB1对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制

  王媛媛，魏殿军，周琛

  现代免疫学. 2020, 40(3): 209-215.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  为探讨miR-129-5p对卵巢癌（ovarian cancer，OC）细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制，qRT-PCR检测不同OC细胞株和正常人卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达水平；在SKOV3细胞中分别转染miR-129-5p模拟物或无关序列，qRT-PCR检测转染后细胞中miR-129-5p的表达情况。生物信息学软件TargetScan预测miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein, HMGB1)基因靶向结合位点，qRT-PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验分析miR-129-5p对HMGB1的靶向调控作用。分别采用MTT和Transwell实验检测SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移能力。将miR-129-5p模拟物和HMGB1 siRNA或siRNA Control共转染至SKOV3细胞，MTT和Transwell实验检测其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果显示，SKOV3细胞中miR-129-5p的表达量显著低于正常人卵巢上皮细胞（P ＜ 0.05）。在SKOV3细胞中转染miR-129-5p模拟物可显著提高miR-129-5p的表达量（P ＜ 0.05）。miR-129-5p与HMGB1 3’非翻译区存在靶向结合位点，且过表达miR-129-5p可抑制HMGB1的表达，miR-129-5p模拟物转染后相对荧光素酶活性显著下降（P ＜ 0.05）。过表达miR-129-5p后，SKOV3细胞增殖能力明显减弱，侵袭和迁移能力明显受到抑制（P ＜ 0.05）。而转染HMGB1 siRNA后，miR-129-5p模拟物对SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用明显减弱（P ＜ 0.05）。以上结果表明miR-129-5p通过靶向调控HMGB1的表达抑制SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移。
• Select
  淋巴细胞主动免疫治疗对胚胎移植反复失败患者妊娠预后的影响

  苏迎春，戚青林

  现代免疫学. 2020, 40(3): 216-220.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  为研究淋巴细胞主动免疫治疗对体外受精（in vitro fertilization，IVF）-胚胎移植(embryo transfer，ET)反复失败患者的临床效果，将同意试行淋巴细胞主动免疫治疗的46对IVF-ET反复失败患者作为观察组，拒绝接受免疫治疗的32对IVF-ET反复失败患者作为对照组，应用ELISA检测2组患者治疗前后外周血抗HLA抗体的转阳情况，观察2组患者在IVF-ET过程中的妊娠相关情况。结果显示，观察组患者抗HLA抗体的转阳率为69.57%，观察组患者的胚胎种植率、临床妊娠率均明显高于对照组(P < 0.05)，而流产率明显低于对照组(P < 0.05)；2组患者的获卵数、受精卵母细胞数、优质胚胎数、移植胚胎数的差异均无统计学意义(P > 0.05)。提示淋巴细胞主动免疫治疗可提高患者抗HLA抗体水平，改善妊娠结局，可作为治疗IVF-ET反复失败的有效技术手段。
• Select
  骆驼奶对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠慢性肠炎的缓解作用

  崔畅婉，于淼，王爽，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 221-225.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  为探究骆驼奶对葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate，DSS）诱导的小鼠慢性肠炎的作用，将6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为2组，对照组使用双蒸水(double distilled water，DDW)灌胃，实验组使用骆驼奶灌胃，1.5%DSS水溶液自由饮用构建慢性肠炎模型。用流式细胞术分析免疫细胞数量和比例，ELISA测定细胞因子水平。在DSS诱导的小鼠慢性肠炎模型中，骆驼奶实验组小鼠比DDW对照组小鼠体质量减轻程度得到明显改善，疾病活动指数下降，CD4⁺T细胞绝对数下降，CD4⁺IL-17A⁺T细胞比例降低，细胞培养上清液中TNF-α、IL-6和IL-17水平降低。提示骆驼奶可调节小鼠肠道内细胞分化和细胞因子分泌，缓解DSS诱导的小鼠慢性肠炎。
• Select
  溃疡性结肠炎相关性结直肠癌大鼠Th1/Th2漂移与微血管密度的关系

  袁权利，王毅刚，唐宇杰，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 226-232.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  为探讨溃疡性结肠炎相关性结直肠癌（ulcerative colitis-associated colorectal cancer，UC-CRC）大鼠Th1/Th2漂移与微血管密度（microvessel density，MVD）的关系，建立UC-CRC大鼠模型，于第14、16、18周分批处死，观察各组结肠组织病理学变化情况，并比较血清、结肠组织中Th2细胞因子IL-4、Th1细胞因子IFN-γ水平及结肠组织中CD4⁺IL-4⁺占比、CD4⁺IFN-γ⁺占比、CD4⁺IFN-γ⁺/CD4⁺IL-4⁺、MVD，分析MVD与IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4的相关性。结果显示，模型组大鼠建模后状态逐渐变差，持续2周后好转；模型组结肠细胞有明显的病理学变化；与对照组比较，模型组各时刻血清和组织中IL-4水平、CD4⁺IL-4⁺占比、MVD较高，IFN-γ水平、CD4⁺IFN-γ⁺占比、IFN-γ/IL-4、CD4⁺IFN-γ⁺/CD4⁺IL-4⁺较低（P ＜ 0.05）；模型组血清和组织中IL-4水平、CD4⁺IL-4⁺占比、MVD均随时间的延长呈升高趋势（P ＜ 0.05），IFN-γ水平、CD4⁺IFN-γ⁺占比、IFN-γ/IL-4、CD4⁺IFN-γ⁺/CD4⁺IL-4⁺均随时间的延长呈下降趋势（P ＜ 0.05），而对照组上述指标变化均不显著（P ＞ 0.05）；不同时刻MVD与血清及组织中IL-4水平呈正相关（P ＜ 0.05），与IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4均呈负相关（P ＜ 0.05）。提示UC-CRC大鼠Th1/Th2平衡向Th2漂移，MVD与Th2细胞因子呈正相关，与Th1细胞因子呈负相关，MVD与Th1/Th2漂移关系密切。
综述
• Select
  类泛素蛋白ISG15调控感染与肿瘤的新进展

  尉宁，张乐乐，王琛，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 233-239.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  IFN刺激基因15（interferon-stimulated gene 15， ISG15）编码的蛋白ISG15是最早被发现的一种类泛素蛋白，在生物体内以单体和复合体形式存在。和泛素一样，ISG15的单体和其共价修饰的蛋白参与并调节了复杂的生物学过程。在病毒、细菌感染以及肿瘤发生过程中，ISG15单体和底物蛋白的共价修饰水平均出现不同程度改变，这表明ISG15在固有免疫的调控中发挥重要作用。越来越多的研究表明ISG15和其共价修饰系统已成为疾病预防和治疗的重要靶点。文章介绍了ISG15的发现、结构特点以及其共价修饰系统，并阐述了近年来ISG15在抗病毒、抗菌和肿瘤发生过程中的重要作用。
• Select
  外泌体标记方法的研究现状

  刘朝阳，王炜，李文博，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 240-244.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  外泌体是细胞分泌的直径为30~150 nm的胞外囊泡，可以运送多种生物活性分子（如RNA、脂质和蛋白质），介导细胞间的信息交流。现已发现，外泌体在各种生理和病理过程中发挥着重要的作用。为了研究外泌体的生物学作用，现已开发出了多种外泌体标记方法进行外泌体的功能研究。根据现有的文献报道，文章将结合外泌体自身的结构特点，对不同的外泌体标记方法，包括荧光染料、荧光蛋白、荧光素酶和物理标记等作一综述。
• Select
  巨噬细胞维持骨稳态及促进骨修复的作用机制概述

  黎富尧，武敬文，江千舟，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 245-247.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  骨代谢受免疫系统的精确调控，在众多骨疾病中都能观察到骨质的明显破坏，如RA、骨质疏松症、骨折、颗粒诱导的骨质溶解等，这些疾病均与炎症反应有关。巨噬细胞是异质性免疫细胞，在不同的微环境中能被极化为促炎的M1型或抑炎的M2型，且表达并释放不同的细胞因子，这对于骨的生理及病理状态都十分重要。最近的研究表明，巨噬细胞定居于骨组织并与骨细胞相互作用，对维持骨稳态及促进骨修复起关键作用。文章对巨噬细胞在其中的作用机制作一综述。
• Select
  SATB1在肿瘤与免疫反应中作用的研究进展

  张丽娜，许昕瑜，任云青

  现代免疫学. 2020, 40(3): 248-251.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  特殊富含AT序列结合蛋白1（special AT rich sequence binding protein 1，SATB1）是一种染色质组织和转录因子，其可通过对基因表达的影响来调节多种细胞周期过程，如细胞的分化、增殖和凋亡。SATB1经历翻译后修饰，通过与共激活因子和共抑制因子的相互作用诱导基因转录的调节。SATB1是一种鉴定的致癌基因，其表达的增加与许多肿瘤的预后不良有关。文章就SATB1在不同肿瘤发生和发展中的作用及其介导的免疫反应进行综述。
• Select
  血小板与免疫细胞、炎症反应和细菌相互作用的概况

  贾芳，周学章

  现代免疫学. 2020, 40(3): 252-256.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  血小板除具有良好的止血功能外，还能积极参与对微生物等外来物质的免疫反应。血小板在平衡清除细菌和诱导免疫应答方面作用复杂。血小板通过特异性受体和颗粒释放与免疫细胞相互作用。近年来，对血小板如何将环境变化传递给其他循环细胞方面的研究取得了许多进展。现对相关研究综述如下。
• Select
  中性粒细胞在细菌性脑膜炎中的作用及机制研究进展

  孙强，黄晶，雷连成

  现代免疫学. 2020, 40(3): 257-260.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  细菌性脑膜炎是好发于人或动物中枢神经系统的急性感染性疾病，常由化脓性细菌感染所致。中性粒细胞是人体免疫系统的重要组成细胞，处于机体抵抗病原微生物、特别是化脓性细菌入侵的前线，在固有免疫中起着重要作用。在细菌性脑膜炎的发生发展过程中，中性粒细胞发挥重要作用，文章就其重要性进行综述。
• Select
  环状RNA在常见自身免疫性疾病中的主要进展

  周敬彩，杜明，杨媛媛，等

  现代免疫学. 2020, 40(3): 261-264.

  摘要 ( ) PDF全文 ( ) 可视化 收藏

  环状RNA(circular RNA，circRNA)是形成共价闭合环的非编码RNA，在转录水平和转录后水平对基因的表达调控起重要作用。circRNA具有稳定性、高度保守性和组织发育特异性等特点。近年来研究发现，circRNA在一些自身免疫性疾病(autoimmune disease， AID)中存在差异表达，具有良好的诊断价值。通过分析差异表达的circRNA，可帮助进一步了解AID发病的分子机制，为疾病的诊疗提供新思路。