2021年, 第41卷, 第6期　刊出日期：2021-11-30

  

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论著
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  异丙酚抑制甲酰基肽受体1减轻脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤

  李成洁，陈健，吴勇，等

  现代免疫学. 2021, 41(6): 441-447.

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  为探讨异丙酚在脓毒症诱导的急性肺损伤（acute lung injury，ALI）小鼠模型中的保护作用并通过体外试验观察其对甲酰基肽受体1（formyl peptide receptor 1，FPR1）激动剂诱导的人中性粒细胞活化的抑制作用，将40只小鼠随机分为4组，每组10只：1组为用50 μL 10% 二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）处理的假手术小鼠；2组为用50 μL异丙酚（40 mg/kg）处理的假手术小鼠；3组为用50 μL 10% DMSO处理的脓毒症小鼠（该模型通过单次腹腔注射200 μL LPS构建）；4组为用50 μL异丙酚（40 mg/kg）处理的脓毒症小鼠。采用免疫组织化学法检测各组小鼠肺组织中FPR1、淋巴细胞抗原6G（lymphocyte antigen 6 complex locus G， Ly6G）表达；髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)测定试剂盒评估肺组织中MPO活性；ELISA检测试剂盒评估支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中主要炎性因子水平。此外， 体外条件下于培养的人中性粒细胞中分别添加DMSO或异丙酚，采用分光光度法检测中性粒细胞释放弹性蛋白酶和超氧化物的情况；Western blotting检测促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen activated protein kinase, MAPK）信号通路蛋白的表达情况。结果显示，脓毒症显著增加了小鼠肺部组织FPR1和Ly6G蛋白表达水平及MPO活性（均P＜0.01），而经腹腔异丙酚注射可有效减少FPR1和Ly6G蛋白表达并显著抑制MPO活性（P＜0.01）。与假手术组相比，脓毒症小鼠BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和CXCL1表达水平显著增加（均P＜0.01），而异丙酚腹腔注射显著逆转了上述变化（均P＜0.05）。体外试验结果显示，异丙酚（5~100 μmol/L）剂量依赖性地显著减少了N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine，fMLF）诱导的中性粒细胞弹性蛋白酶和超氧化物释放（均P＜0.05）。Western blotting分析显示，异丙酚显著降低了fMLF诱导的人中性粒细胞细胞外信号调节激酶（extracellular signal regulated kinase, ERK）、p38 MAPK和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase, JNK）的磷酸化水平（均P＜0.001）。由此，在脓毒症诱导的小鼠ALI模型中，异丙酚腹腔注射可显著改善其肺部损伤，下调FPR1和Ly6G表达及肺组织中中性粒细胞数。进一步体外试验证实，异丙酚对fMLF诱导的中性粒细胞活化的抑制作用是通过与FPR1结合介导的，可抑制FPR1下游信号转导和炎症级联反应。
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  马齿苋总黄酮改善小鼠非酒精性脂肪肝的作用

  姚瑞强，宋维芳，胡鑫丽，等

  现代免疫学. 2021, 41(6): 448-454.

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  为探讨马齿苋总黄酮（portulaca oleracea total flavones，POTF）对昆明小鼠的非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）脂质代谢异常、氧化应激及炎症反应的影响，将小鼠随机分为5组：对照组、NAFLD组、POTF 2.5 mg/kg组、POTF 5 mg/kg组和POTF 10 mg/kg组。采用全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、三酰甘油（triglyceride，TG）和空腹血糖；H-E和油红O染色观察肝组织损伤和脂质堆积情况；Western blotting检测脂代谢标志物乙酰辅酶A羧化酶（acetyl CoA carboxylase，ACC）和肉毒碱棕榈酰转移酶1（carnitine palmitoyl transferase 1，CPT-1）的表达；试剂盒检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、丙二醛（malondialdehyde，MDA）和谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平；ELISA检测肝组织IL-6和IL-10水平；免疫组化（immunohistochemistry，IHC）检测NF-κB p65的表达。结果显示，POTF可明显改善肝组织损伤和脂质堆积情况。与NAFLD组比较，POTF 5 mg/kg组和10 mg/kg组ALT、AST、TG、空腹血糖、ACC、IL-6、MDA及NF-κB p65水平显著降低（P<0.05），而CPT-1水平、GSH水平、SOD活性及IL-10水平显著升高（P<0.05）。该研究提示，POTF可能通过减轻脂质代谢异常、氧化应激和炎症反应改善高脂饮食小鼠NAFLD。
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  下调ROR1表达削弱黑色素瘤疫苗抗瘤效应

  王玲，梅峰，薛蕊，等

  现代免疫学. 2021, 41(6): 455-461.

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  黑色素瘤细胞高表达受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1， ROR1），其可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移，是治疗黑色素瘤的重要靶标。为探讨下调黑色素瘤细胞ROR1表达对制备的黑色素瘤疫苗抗瘤效应的影响，通过慢病毒载体shRNA下调B16F10细胞ROR1分子表达。反复冻融各实验组B16F10细胞制备疫苗，免疫C57BL/6小鼠3次后，用B16F10细胞攻击小鼠，以评价免疫鼠的免疫系统活性和抗肿瘤效应。结果显示，与对照组相比，shROR1/B16F10细胞ROR1分子表达水平显著降低(P<0.01)，用其制备疫苗免疫小鼠会抑制免疫系统对肿瘤细胞的攻击及机体抗瘤效应。由此，ROR1是黑色素瘤疫苗的重要靶点，下调ROR1表达将导致黑色素瘤疫苗免疫活性减弱而影响免疫鼠抗黑色素瘤效应。
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  桔梗多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

  王菊，梁蕾

  现代免疫学. 2021, 41(6): 462-467.

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  为探讨桔梗多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响，于小鼠右腋皮下注射S180细胞腹水悬液构建荷瘤小鼠模型，随机分为模型对照组、环磷酰胺（0.02 g/kg）组及桔梗多糖低（0.2 g/kg）、高（0.4 g/kg）剂量组，每组10只；另取10只健康C57BL/6小鼠作为空白对照组。环磷酰胺组腹腔注射给药，桔梗多糖低、高剂量组则灌胃给药，1次/d，连续治疗14 d。通过测定瘤质量、抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、淋巴细胞增殖刺激指数、NK细胞活度、血清细胞因子水平及瘤组织蛋白表达水平等指标，评价桔梗多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响。结果显示，与模型对照组比较，桔梗多糖低、高剂量组的瘤质量显著降低（均P＜0.05），抑瘤率显著增加（均P＜0.05）；与模型对照组比较，桔梗多糖低、高剂量组小鼠胸腺指数、脾脏指数、淋巴细胞增殖刺激指数、NK细胞活度、IL-2、IFN-γ水平显著增加（均P＜0.05），而TLR4、髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）、NF-κB蛋白表达水平显著降低（均P＜0.05）。由此，桔梗多糖可明显抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长，该作用与改善机体抗肿瘤免疫功能有关。
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  依托考昔抑制SDF-1/CXCR4信号通路影响骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子表达

  王雷，余德涛，邢祯全

  现代免疫学. 2021, 41(6): 468-472.

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  为探讨依托考昔对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡、炎性因子表达的影响及其对基质细胞衍生因子1（stromal cell derived factor 1，SDF-1）/CXC趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4，CXCR4）信号通路的调控作用，原代分离培养人骨关节炎软骨细胞，分别加入浓度为12.5、25.0和50.0 ng/mL的依托考昔处理24 h，同时将正常培养的细胞作为对照组。采用FACS检测细胞凋亡率；MTT检测细胞存活率；ELISA检测TNF-α、IL-1β的表达水平；qRT-PCR检测SDF-1、CXCR4的表达量；Western blotting检测未剪切的Caspase-3（pro-Caspase-3）、活化的Caspase-3（cleaved Caspase-3）的表达量。结果显示，与对照组比较，依托考昔不同剂量组细胞存活率及pro-Caspase-3蛋白水平显著升高（P＜0.05），细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白、TNF-α、IL-1β、SDF-1及CXCR4水平显著降低（P＜0.05）。该研究提示，依托考昔可能通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路促进骨关节炎软骨细胞增殖及抑制细胞凋亡，并减少炎性因子的分泌。
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  miR-760靶基因BATF3在非小细胞肺癌组织中的表达及其对肿瘤细胞恶性生物学行为的影响

  李琼，李秋燕，张艳

  现代免疫学. 2021, 41(6): 473-480.

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  为探究miR-760靶基因碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3（basic leucine zipper ATF-like transcription factor 3， BATF3）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）组织中的表达及其对肿瘤细胞增殖与转移的影响，收集2016年6月至2018年6月于兰州大学第一医院手术治疗的36例NSCLC患者肿瘤组织与癌旁正常组织，qRT-PCR检测组织中miR-760和BATF3的mRNA表达情况。培养NSCLC细胞系A549、H1299和H23及正常人肺上皮细胞BEAS-2B，qRT-PCR和Western blotting检测细胞中miR-760和BATF3的表达情况；MTT法检测miR-760和BATF3对肿瘤细胞增殖能力的影响；Transwell法检测miR-760和BATF3对肿瘤细胞迁移能力的影响；双荧光素酶报告基因实验验证BATF3与miR-760在NSCLC中的靶向作用关系。结果表明，miR-760在NSCLC组织中的表达与癌旁正常组织相比显著下调（P＜0.01），同时miR-760在NSCLC细胞系中的表达量显著下调，其中在A549细胞中表达最低（均P＜0.01）；BATF3 mRNA在NSCLC组织中的表达量与邻近正常组织相比显著上调（P＜0.01），同时BATF3在NSCLC细胞系中的表达也显著上调，其中在A549细胞中表达最高（均P＜0.01）。此外，miR-760过表达抑制NSCLC细胞的增殖和迁移；BATF3是NSCLC肿瘤细胞中miR-760的直接靶点；miR-760表达升高显著抑制NSCLC细胞中BATF3的表达（均P＜0.01）。由此，miR-760的表达抑制NSCLC组织中BATF3的表达，miR-760通过调控BATF3的表达抑制NSCLC细胞的增殖和迁移。综上，miR-760可能通过调控BATF3的表达在NSCLC中部分发挥抑癌基因的作用。
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  姜黄素可缓解多囊卵巢综合征大鼠卵巢炎症状态并改善其功能

  张韵函，谢盛言，何珊珊

  现代免疫学. 2021, 41(6): 481-486.

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  为探讨姜黄素对多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）大鼠模型血清性激素水平及组织中免疫因子IL-6、CRP、TNF-α表达的影响，将70只雌性SD大鼠随机分为正常组（10只）和造模组（60只）。造模成功后将其分为PCOS模型组、高、中、低药物治疗组，给予各组大鼠腹腔注射姜黄素，治疗结束后收集大鼠血清并分离卵巢进行检测，计算卵巢指数、大鼠体质量；采用血糖检测仪检测各组大鼠空腹血糖（fasting blood glucose， FBG）、空腹血清胰岛素（fasting serum insulin，FINS）和稳态模型胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment-insulin resistance index，HOMA-IR）水平；采用ELISA检测试剂盒检测血清性激素［卵泡刺激素( follicle-stimulating hormone，FSH)、雌二醇(estradiol，E2)、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、孕酮（progesterone，P）、睾酮（testosterone，T）］水平及TNF-α、IL-6、CRP水平；采用免疫组织化学法检测卵巢组织中TNF-α和IL-6的表达。血清及组织学检测结果显示，药物治疗组与PCOS组相比血清中性激素及FBG、FINS、HOMA-IR水平得到改善（P＜0.05）；TNF-α、IL-6、CRP等炎性因子水平显著减少（P＜0.05）；PCOS组卵泡和卵巢颗粒层中TNF-α及IL-6表达水平显著高于正常组（P＜0.05），药物干预后表达量显著降低（P＜0.05）。研究提示，姜黄素对PCOS的炎症改善作用与其抑制TNF-α、IL-6和CRP的表达有关，可能通过此途径改善性激素水平并调节血糖水平。
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  miR-3619-5p靶向PFKFB3抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

  郭银谋，王玉梅，陈贡斌，等

  现代免疫学. 2021, 41(6): 487-494.

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  为研究miR-3619-5p和6磷酸果糖2激酶/果糖-2，6-二磷酸酶3（6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2，6-biphosphatase 3，PFKFB3）对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，采用qRT-PCR检测35例结肠癌组织和癌旁组织中miR-3619-5p和PFKFB3 mRNA的水平。在结肠癌细胞HCT116中转染miR-3619-5p模拟物或si-PFKFB3，以过表达miR-3619-5p或抑制PFKFB3。在结肠癌细胞HCT116中转染miR-3619-5p模拟物和PFKFB3过表达载体（pcDNA-PFKFB3），同时过表达miR-3619-5p和PFKFB3。采用CCK-8试验和Transwell试验分别检测结肠癌细胞HCT116增殖、迁移和侵袭能力，Western blotting检测细胞中PFKFB3、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、基质金属蛋白酶2（matrix metalloprotease 2，MMP-2）和基质金属蛋白酶9（matrix metalloprotease 9，MMP-9）蛋白水平，双荧光素酶报告系统验证miR-3619-5p与PFKFB3的靶向关系。结果显示，与癌旁组织比较，结肠癌组织中miR-3619-5p水平显著降低（P<0.05），PFKFB3 mRNA和蛋白水平显著升高（P<0.05）；过表达miR-3619-5p或抑制PFKFB3均可降低Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量，提高p21表达量，降低细胞光密度（D）值、迁移和侵袭细胞数；miR-3619-5p靶向负调控PFKFB3的表达；过表达PFKFB3可逆转miR-3619-5p过表达对HCT116细胞增殖、侵袭和迁移的影响。该研究提示，miR-3619-5p可通过靶向PFKFB3抑制HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭，miR-3619-5p可能是结肠癌治疗的潜在分子靶点。
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  IL-7和IL-15在前列腺癌患者血清以及组织中的表达水平及其临床意义

  雪合热提·萨塔尔，迪力夏提·马木提，阿卜杜日斯·阿卜力克木

  现代免疫学. 2021, 41(6): 495-498.

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  为研究IL-7和IL-15在前列腺癌患者血清以及癌组织中的表达水平及其临床意义，采用ELISA检测血清中IL-7和IL-15水平,采用免疫组织化学法检测前列腺癌组织中IL-7和IL-15的表达情况，分析IL-7和IL-15在前列腺癌患者血清以及组织中的表达水平与前列腺癌临床病理特征的相关性。结果显示，IL-7和IL-15在前列腺癌组织中的阳性表达率分别为72.16%和62.96%，均明显高于前列腺增生组织(38.23%、35.29%，P＜0.05)；IL-7和IL-15在前列腺癌患者中的表达水平与肿瘤的临床分期、分化程度、有无淋巴结转移等生物学行为显著相关(P＜0.05)。该研究提示，IL-7和IL-15在前列腺癌组织中高表达，可能存在协同作用，并与前列腺癌侵袭性有关。
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  血清NLRP3蛋白水平对成人癫痫患者短期内再发风险的预测价值

  刘睿，郭翀，彭江涛，等

  现代免疫学. 2021, 41(6): 499-503.

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  为探究成人癫痫患者血清NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3（NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3， NLRP3）水平对短期内（≤7 d）癫痫再发风险的预测价值，收集2018年9月—2019年8月于滨州医学院附属医院收治的61例癫痫患者，其中丛集性发作者30例，非丛集性发作者31例。采集患者的一般资料，ELISA检测血清NLRP3炎症小体水平。根据住院后7 d内癫痫是否再发，分为癫痫再发组和未再发组，对一般资料进行统计学分析。随访过程中，有13例患者癫痫再次发作，比较2组发现，NLRP3水平、年龄、丛集性癫痫发生率有显著差异（均P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示，NLRP3水平及年龄是癫痫患者短期内（≤7 d）再发的独立危险因素(均P＜0.05)。NLRP3水平预测癫痫患者短期内再发的AUC为0.769（95%CI：0.608～0.931），截止值91.47 μg/L，敏感度84.6%，特异度64.6%。以上结果表明，NLRP3水平对成人癫痫短期内再发有一定预测价值，阻断NLRP3生成可能有助于癫痫的治疗。
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  壮药大火草抑制非细菌性前列腺炎模型大鼠炎症反应

  王文杰，史宏，张静，等

  现代免疫学. 2021, 41(6): 504-508.

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  壮药大火草在前列腺炎的临床治疗上效果较好。为探究该药在前列腺炎中的药理作用，采用低浓度（1.46 g/mL）和高浓度（2.92 g/mL）的壮药大火草煎剂干预λ-角叉胶诱导的SD大鼠非细菌性前列腺炎模型。结果显示：（1）从大鼠前列腺腺体基本特征观察，各组之间差异无统计学意义（均P＞0.05）；（2）H-E染色观察大鼠前列腺组织病理学情况，发现模型组组织中出现严重的炎性细胞浸润现象，而高浓度大火草治疗后，炎性细胞浸润现象减轻；（3）低、高浓度大火草治疗可显著降低前列腺炎大鼠血清中IL-2、IL-4、IL-8、TNF-α和IFN-γ水平（均P＜0.05），而IL-10水平显著升高（P＜0.05），且所有细胞因子的水平变化呈现出浓度依赖性。该研究提示，使用大火草治疗前列腺炎值得应用推广。
综述
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  髓源性抑制细胞在母胎界面的免疫调节作用

  黄丹，崔树娜

  现代免疫学. 2021, 41(6): 509-514.

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  髓源性抑制细胞（myeloid derived suppressor cell， MDSC）指一群髓系来源的未成熟异质性免疫抑制细胞，其研究多集中于肿瘤、感染和自身免疫性疾病。近年来研究发现，MDSC也参与母胎免疫，尤其是粒细胞样髓源性抑制细胞（granulocyte like myeloid derived suppressor cell， G-MDSC）的数量增加在母胎免疫动态平衡和生理环境（如正常妊娠）中表现出有益作用，在胎盘形成、胎儿生长和发育中起着关键作用。妊娠期间MDSC的缺失或调节失衡与妊娠相关并发症密切相关。脐带血和新生儿体内亦有大量MDSC，它们可平衡免疫反应并防止新生儿的侵袭性炎症反应。因此，该综述旨在阐明有关MDSC的基本特征，并讨论它们在母胎界面和妊娠相关并发症中的可能作用。
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  外泌体在类风湿关节炎发病机制和诊疗中的作用

  董鑫鹏，翟耘浩，陈广洁

  现代免疫学. 2021, 41(6): 515-519.

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  类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）作为一种自身免疫性疾病，其引起的慢性炎症可对人体滑膜关节产生不可逆损伤，其发病机制复杂且预后不理想，目前没有彻底治愈的疗法。外泌体是细胞外囊泡中的一个亚群，其携带的相关物质可以多方面对靶细胞的生理状态进行调节。近年来多项研究提示，外泌体可能在RA发病中起到了关键性的作用，针对外泌体及其相关成分进行研究对于全面揭示RA的发病机制以及借助外泌体来针对RA进行实验性治疗都具有潜在的、较大的价值。该文就外泌体在RA发病机制和诊疗中作用的研究进展作一综述。
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  PD-1/PD-L1在系统性红斑狼疮患者疾病活动中作用的研究进展

  陈雁飞，陈卫红，王瑞婷，等

  现代免疫学. 2021, 41(6): 520-523.

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  PD-1／PD-L1作为重要的免疫调节通路，在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus， SLE)患者外周血中T细胞、B细胞及各种固有免疫细胞表面的表达情况及发挥效应的途径各不相同。该文概述了目前已知的 PD-1/PD-L1通路在SLE发病及病情活动中所起的重要作用，并为该疾病的治疗提供策略。
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  NLRP3炎症小体参与下肢动脉腔内治疗后再狭窄发生的研究进展

  刘宇婷，杨硕菲，薛冠华

  现代免疫学. 2021, 41(6): 524-528.

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  腔内治疗已成为下肢动脉硬化闭塞症（arteriosclerosis obliterans，ASO）的一线治疗方式，但腔内治疗后再狭窄的发生率较高，严重影响靶血管的长期通畅。临床上尚无针对下肢动脉腔内治疗后再狭窄的有效治疗方法，再狭窄的发生机制亟待研究。血管内膜炎症反应引起内膜过度增生是引起下肢动脉腔内治疗后再狭窄的重要原因。炎症小体是一种细胞胞质内的多聚蛋白复合物，其激活后可促进炎症反应的发生。近年来，NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3（NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3，NLRP3）炎症小体在血管内膜炎症中的作用受到关注。研究发现，NLRP3炎症小体的激活是血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）表型转化、下肢动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）及腔内治疗后再狭窄发生的关键环节。NLRP3炎症小体在下肢AS及腔内治疗后再狭窄中作用机制的研究有望为下肢动脉再狭窄的临床治疗提供新思路和新靶点。该文对NLRP3炎症小体的结构和功能及其参与AS和下肢动脉腔内治疗后再狭窄发生机制的研究进展进行综述。
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  TIGIT信号途径介导多发性骨髓瘤免疫逃逸的研究进展

  刘珊，施怡玢，尚晋，等

  现代免疫学. 2021, 41(6): 529-532.

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  肿瘤微环境免疫抑制是多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）重要的病理特征之一。T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域（T-cell immunoglobulin and ITIM domain，TIGIT）是近年新兴的免疫检查点蛋白，多表达于Treg、活化型T细胞和NK细胞。目前研究证实TIGIT/CD155与肿瘤发生、发展密切联系。在不同肿瘤动物模型中阻断TIGIT显示出了不俗的治疗效果，说明TIGIT在肿瘤免疫中发挥重要作用，有望成为肿瘤治疗的重要靶点。该文主要针对TIGIT在MM免疫逃逸中的作用及可能机制进行综述。
简讯
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  《现代免疫学》2021年第41卷第1～6期总目次

  《现代免疫学》编辑部

  现代免疫学. 2021, 41(6): 533.

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  《现代免疫学》编辑部

  现代免疫学. 2021, 41(6): 534.

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