2018年, 第38卷, 第2期　刊出日期：2018-03-31

  

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论著
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  阳离子脂质体Lipofectamine 3000对贴壁细胞、悬浮细胞和原代细胞转染效率比较的研究

  吴婷，吴江，金书欣，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 89-94.

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  为了比较阳离子脂质体Lipofectamine 3000 (Lipo3000) 在不同细胞类型中的转染效率，课题组分别在贴壁细胞NIH3T3、悬浮细胞EL4和原代细胞CD4⁺T细胞中，利用Lipo3000将不同浓度的miRNA mimics转染至细胞内，通过流式细胞术检测的方法，比较不同细胞之间以及同一细胞、不同浓度的miRNA mimics组之间转染效率的差异。结果显示，在NIH3T3细胞中，miRNA mimics为100 nmol/L时，转染效率最高，可达(41.47 ± 8.10)%；而在EL4和CD4⁺T细胞中，随着miRNA mimics浓度的增加，转染效率呈上升的趋势，最高分别可达(12.13 ± 1.16)%和(3.80 ± 0.60)%。可见，Lipo3000在贴壁细胞和悬浮细胞的转染效率明显高于原代细胞。
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  IL-34对类风湿关节炎滑膜间充质干细胞色素上皮衍生因子表达的作用研究

  李寒，欧阳寻丽，汤亚微，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 95-99.

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  初步研究IL-34对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cell, SMSC)色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF)表达的影响。选取6例RA 患者，分离并培养其 SMSC，加入PE标记的抗CD73、CD90、CD105抗体和APC标记的抗CD14、CD34、CD45抗体及同型对照，采用流式细胞术检测SMSC表型。而后加入IL-34 (100 ng/mL)刺激0 h、6 h、24 h、48 h以及72 h，信号通路抑制剂(10 μmol/L)刺激1 h/IL-34 (100 ng/mL)刺激24 h，通过ELISA检测SMSC培养上清中PEDF蛋白的表达，RT-PCR检测SMSC PEDF的转录水平。组间比较采用独立样本t检验。对培养细胞克隆进行鉴定，结果显示细胞表面阳性表达CD73、CD90、CD105，阴性表达 CD14、CD34、CD45。PCR结果显示，与对照组相比，IL-34刺激6h的PEDF mRNA水平明显降低。同时ELISA表明，IL-34 刺激24 h、48 h以及72 h后的PEDF蛋白水平与对照组相比，也明显降低(P < 0.05)。在细胞培养体系中加入NF-κB、p38 MAPK信号通路抑制剂后，RA SMSC产生的PEDF水平明显升高(P < 0.05)。以上结果显示，实验中分离纯化的 RA SMSC高表达CD73、CD90、CD105，不表达CD14、CD34，符合SMSC表型特点。IL-34介导的抑制RA SMSC分泌PEDF可能通过激活p38MAPK和NF-κB信号通路实现。
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  系统性红斑狼疮患者巨噬细胞表型和功能初步研究

  陈纬纬，邓伟，张卓亚，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 100-103.

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  为了比较健康者与SLE患者巨噬细胞表型和吞噬功能的不同，收集性别、年龄匹配的健康对照者及SLE患者外周血，密度梯度离心法分离单个核细胞，磁珠分选CD14⁺单核细胞，巨噬细胞集落刺激因子诱导7 d，分化为成熟巨噬细胞。FACS检测巨噬细胞表面CD163表达。取健康人CD4⁺T细胞标记CFSE，在抗CD3、CD28抗体刺激下，以5∶1比例分别与SLE和HC巨噬细胞共培养4 d，FACS检测CD4⁺T细胞增殖比例。紫外辐照Jurkat T细胞株诱导人来源凋亡细胞，将pHrodo Green标记的凋亡细胞(5∶1)与SLE和HC巨噬细胞共培养2 h，FACS检测pHrodo⁺CD14⁺ 巨噬细胞的百分率。结果显示，与HC相比，SLE巨噬细胞CD163表达量显著下降；SLE巨噬细胞对CD4+T细胞增殖抑制能力显著降低；SLE巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬功能显著下降。这些结果提示SLE患者巨噬细胞表型、免疫调节能力和吞噬功能存在异常，可能参与其发病。
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  IL-35与乳腺癌及其转移的相关性研究

  王爱红，赵菊梅，杜娟，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 104-108.

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  免疫抑制与肿瘤转移紧密相关，IL-35是一种免疫抑制分子，本文旨在探讨IL-35在乳腺癌的表达及其与肿瘤转移的相关性。研究收集2012年7月至2016年12月来延安大学附属医院就诊的乳腺癌患者，转移组共20例患者，病理诊断为乳腺癌，且发生了淋巴结转移，对照组共20例患者，病理诊断为乳腺癌，未发现淋巴结的转移；免疫组化和Western blotting研究IL-35在乳腺癌中的表达；细胞侵袭实验和细胞划痕愈合实验研究IL-35与乳腺癌转移的关系。免疫组化的结果显示对照组患者乳腺癌组织中可见少量的IL-35表达，周围正常乳腺组织未见表达；转移组乳腺癌组织中IL-35的表达显著升高，相对于对照组，平均光密度增加了2.4倍(P < 0.05)。Western blotting的结果显示乳腺癌转移患者肿瘤内高表达IL-35，相对于对照组，转移组IL-35的表达上升了2.87倍(P < 0.05)。Transwell侵袭实验的结果显示低浓度的IL-35具有一定的促进乳腺癌细胞侵袭的作用，高浓度的IL-35能够显著地促进乳腺癌细胞侵袭，相对于对照组和低浓度组，侵袭的细胞数量分别上升了4.73倍和1.17倍(P < 0.05)。划痕实验的结果显示低浓度的IL-35具有一定的促进乳腺癌细胞迁移的作用，高浓度的IL-35能够显著地促进乳腺癌细胞迁移，相对于对照组和低浓度组，划痕闭合的面积分别增加了145.46%和58.82%(P < 0.05)。总之，IL-35在乳腺癌转移患者组织中高表达，与乳腺癌细胞的侵袭和转移能力呈正相关｡
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  不同亚群滤泡辅助性T细胞在骨肉瘤患者中的数量变化及临床意义

  周凤玲，郑为东

  现代免疫学. 2018, 38(2): 109-113.

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  滤泡辅助性T细胞(follicular helper T, Tfh)在多种肿瘤疾病的发病机制中发挥着重要作用，然而骨肉瘤疾病的发病过程是否有Tfh的参与尚不清楚。为了研究外周血Tfh在骨肉瘤发病过程中的变化及其与疾病进展的关系，本研究运用流式细胞术，测定骨肉瘤患者和健康对照组外周静脉血中不同Tfh亚群的数量。课题组发现骨肉瘤患者外周血中存在较多数量的PD-1⁺Tfh､ICOS⁺Tfh及IL-21⁺Tfh，有趣的是课题组发现骨肉瘤患者外周血中PD-1⁺Tfh的数量随着肿瘤分期等级的增高呈递增的趋势。这提示Tfh在骨肉瘤的发病过程中发挥着重要作用，PD-1⁺Tfh与疾病进展有密切的关系，可以作为骨肉瘤疾病进展的一种生物学指标。
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  慢性阻塞性肺疾病患者外周血Th22的检测及临床意义

  白容，刘俊

  现代免疫学. 2018, 38(2): 114-119.

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  探讨慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者外周血Th22的变化及其临床意义。选取2014年1月至2017年1月到我院就诊的COPD患者220例为研究对象，另取50例健康体检者为正常对照组。根据患者症状严重程度将COPD患者分为A组(低危、症状轻)、B组(低危、症状重)、C组(高危、症状轻)及D组(高危、症状重)，同时针对性地给予吸入性糖皮质激素/长效β2受体激动剂或吸入性糖皮质激素/长效β2受体激动剂+长效胆碱能药物治疗，检测患者治疗前后外周血Th22、白细胞介素(IL-22、IL-17)水平及肺功能等指标，分析Th22水平与其他临床指标间的相关性。结果显示COPD患者外周血Th22、IL-22及IL-17水平显著高于健康对照组(P < 0.05)。B、D组COPD患者外周血Th22、细胞因子(IL-22、IL-17)水平及慢性阻塞性肺疾病评估测试(CAT评分)显著高于A、C组患者(P < 0.05)。与治疗前相比，COPD患者治疗后外周血Th22、细胞因子(IL-22、IL-17)水平、CAT评分明显降低(P < 0.05)。COPD患者Th22水平同细胞因子IL-22、IL-17水平、CAT评分均呈显著正相关(治疗前: r=0.812, P=0.010; r=0.754, P=0.020; r=0.786, P=0.015; 治疗后: r=0.791, P=0.013; r=0.704, P=0.031; r=0.732, P=0.025)。研究表明外周血Th22及其相关细胞因子在COPD患者中明显升高，对于评估COPD患者病情严重程度及治疗效果具有重要的临床应用价值。
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  细胞因子IL-2､IL-6､IL-8和TNF-α与危重症患者血流感染的相关性研究

  郭健莲，刘惠娜，卢龙坤，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 120-123.

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  为探讨血清IL-2、IL-6、IL-8和TNF-α对危重症患者早期血流感染的诊断意义，收集重症监护病房(ICU)收治的血流感染患者77例，同时设对照组22例，空腹采集静脉血，采用ELISA方法检测血清IL-2､IL-6､IL-8和TNF-α的水平，同时进行血液培养明确病原菌，评价细胞因子与危重症患者血流感染的关系。结果显示血流感染组血清中的4种细胞因子显著高于健康对照组(P < 0.01)；不同病原菌感染组血清中的4种细胞因子水平均具有一定的差异性(P < 0.001)，其中真菌感染组细胞因子水平最高，依次是革兰阴性菌感染组，最低的是革兰阳性菌感染组；IL-2､IL-6､IL-8和TNF-α的ROC曲线下面积分别为0.993、0.994、0.997和0.905。由此，IL-2､IL-6､IL-8和TNF-α在危重症患者血流感染早期诊断中具有较高的敏感性和特异性，可作为早期诊断的检测指标。
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  脾氨肽联合更昔洛韦治疗对小儿巨细胞病毒感染的T淋巴细胞亚群及CMV-DNA载量影响

  王金范

  现代免疫学. 2018, 38(2): 124-128.

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  研究脾氨肽联合更昔洛韦治疗对巨细胞病毒感染患儿血清T淋巴细胞亚群及尿液CMV-DNA载量的影响。样本为巨细胞病毒感染患儿98例，按照随机数字法将其均分为观察组和对照组，每组49例。所有患儿入院后均接受对症支持治疗，并给予更昔洛韦静脉滴注抗感染治疗，在此基础上，观察组患儿给予口服脾氨肽联合治疗，疗程均为4周。结果显示，观察组患儿的治疗总有效率为89.80%，对照组患儿的治疗总有效率为73.47% (χ²=4.36, P=0.04)；两组患儿血清CD4⁺T细胞和CD4⁺/CD8⁺T细胞明显高于治疗前，且观察组高于对照组，CD8⁺T细胞水平明显低于治疗前，且观察组低于对照组，比较差异均有统计学意义(P < 0.01)；两组患儿治疗前尿液CMV-DNA载量比较无显著性差异(P > 0.05)，经过治疗后均明显低于治疗前，且观察组低于对照组，比较均有统计学意义(P < 0.01)；观察组患儿不良反应发生率(14.29%)高于对照组患儿(12.24%)，但比较差异无统计学意义(χ²=0.09, P=0.76)。综上说明脾氨肽联合更昔洛韦治疗小儿巨细胞病毒感染的效果较好，能有效纠正T淋巴细胞亚群失衡、降低CMV-DNA载量，且使用安全，值得在临床推广使用。
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  RhoA参与系统性红斑狼疮发病的相关性研究

  范薇，李凯彦，陈旭艳

  现代免疫学. 2018, 38(2): 129-134.

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  本研究旨在探索RhoA在SLE患者中的表达及临床意义。通过RT-PCR方法，检测诊断明确的SLE患者(n=40)与健康对照者(n=58)外周血细胞中RhoA的表达水平，分析其与SLE临床特征及IFN积分的相关性。同健康对照组相比，RhoA在SLE患者的外周血细胞中的表达水平显著升高(P < 0.000 1)，结合临床资料分析提示RhoA的表达水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)及肾脏损害活动指数(Renal-SLEDAI)呈正相关，通过干扰素积分相关性研究，发现RhoA的基因表达与干扰素积分显著正相关。课题组的研究结果表明RhoA与SLE疾病活动性相关，RhoA可能参与了SLE的发病。
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  紫草多糖对CCl₄诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用及机制研究

  张博，谢云亮

  现代免疫学. 2018, 38(2): 135-139.

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  为探讨LEP对CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤模型的保护作用及潜在机制，将ICR小鼠随机分为空白对照组、模型组、LEP低[100 mg/(kg•d)]、中[200 mg/(kg•d)]、高[400 mg/(kg•d)]剂量组及联苯双酯[100 mg/(kg•d)]组，每组10只；灌胃给药，1次/d，连续15 d。末次给药结束后1 h，模型组、LEP低、中、高剂量组及联苯双酯组腹腔注射2.0 mL/kg的CCl₄(10%)。造模6 h后，眼底静脉丛采血，取肝脏、计算肝指数，并检测ALT、AST、NO、NOS、MDA、SOD、GSH、TNF-α、IL-6以及IL-1β水平。结果显示，与模型组比较，LEP可以降低肝质量及肝指数，其中高剂量组的肝质量及中、高剂量组的肝指数均显著性下降(P < 0.05)；LEP各剂量组的血清ALT、AST及肝组织NO、NOS、MDA水平与模型组比较均显著降低，而肝组织SOD、GSH 水平显著升高(P < 0.05)；与模型组比较，中、高剂量组的血清TNF-α、IL-1β水平及各剂量组的IL-6水平显著降低(P < 0.05)。以上实验结果提示，LEP具有保护CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤作用，该作用与其具有的抗氧化和抗炎作用有关。
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  GDNF增强Treg促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移的作用研究

  魏敬军，张永霞，李军，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 140-144.

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  为探讨胶质细胞源神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor, GDNF)增强Treg促非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer, NSCLC)细胞增殖和转移的作用，分离人外周血中淋巴细胞，用CD4、CD25和Foxp3标记外周血中的Treg；ELISA检测上清中IL-10和TGF-β的水平；EDU实验检测NSCLC细胞的增殖水平；Transwell侵袭实验检测NSCLC细胞的侵袭能力。流式结果显示GDNF能够显著促进淋巴细胞中Treg比例的上升，相对于对照组，低浓度GDNF组Treg的比例增加了6.37倍，相对于低浓度组，高浓度组Treg的比例增加了1.17倍(P < 0.05)；ELISA结果显示GDNF促进Treg分泌IL-10和TGF-β，相对于对照组，低浓度组上清中IL-10和TGF-β的浓度分别增加了4.92倍和4.86倍，相对于低浓度组，高浓度组IL-10和TGF-β的浓度分别增加了108%和119%(P < 0.05)；EDU实验结果显示GDNF能增强Treg促NSCLC细胞增殖作用，相对于Treg组，低浓度和高浓度组NSCLC细胞的增殖率分别上升了77%和144%(P < 0.05)；Transwell实验结果显示GDNF能增强Treg促进NSCLC细胞侵袭的作用，相对于Treg组，低浓度和高浓度GDNF组侵袭细胞的比例分别上升了2.86倍和5.83倍(P < 0.05)；IL-10和TGF-β的阻断均能部分降低GDNF增强Treg促进NSCLC细胞增殖和侵袭的作用(P均 < 0.05)。总之，GDNF能够通过诱导Treg的增殖，进而促进NSCLC细胞增殖和侵袭。
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  免疫球蛋白联合血清sP-selectin、sICAM-1对肝癌的辅助诊断意义

  李春香，李忠原，李显彬，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 145-151.

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  为探讨免疫球蛋白联合血清跨膜P选择素(sP-selectin)、sICAM-1对肝癌、乙肝肝硬化的鉴别诊断价值，选取本院2014年1月至2016年12月收治的乙肝肝硬化患者及原发性肝癌患者共计203例作为研究对象，分别测定患者sP-selectin、sICAM-1、免疫球蛋白和相关血清指标。比较不同肝硬化患者和肝癌患者血清指标差异性，Pearson分析血清sP-selectin、sICAM-1、免疫球蛋白和相关血清指标相关性，logistic多因素回归分析肝硬化转肝癌危险因素，受试者工作特征(ROC)曲线评价诊断效率。结果发现，不同Child-Pugh分级肝硬化患者中，C级患者sP-selectin、sICAM-1、IgM、IgG、IgA显著高于B级和A级患者(P < 0.05)。B级患者sP-selectin、sICAM-1、IgM、IgG、IgA显著高于A级患者(P < 0.05)。多发癌灶患者和单发癌灶原发性肝癌患者sP-selectin、sICAM-1和免疫球蛋白表达差异无统计学意义(P > 0.05)。II期原发性肝癌患者sP-selectin、sICAM-1和免疫球蛋白显著高于I期患者(P < 0.05)。肝硬化患者sP-selectin、sICAM-1、免疫球蛋白之间均互为正相关性(P < 0.05)。以肝硬化是否转原发性肝癌为因变量进行多因素logistic回归分析，结果显示，ALT、AST、sP-selectin、sICAM-1、IgM、IgG、IgA均是肝硬化转原发性肝癌的危险因素。ROC曲线分析可得，sICAM-1和sP-selectin诊断肝硬化转肝癌敏感度和特异度均高于其他因素。由此，免疫球蛋白联合血清sP-selectin、sICAM-1对肝癌、乙肝肝硬化的鉴别诊断准确度较高，对判断肝硬化可能发展成肝癌具有一定辅助价值。
综述
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  小鼠生长过程中T淋巴细胞变化的研究进展

  陶新鑫，马丽娜，姚新生

  现代免疫学. 2018, 38(2): 152-157.

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  机体衰老过程中不仅免疫器官组织会发生相应的变化，免疫功能也会下降。T淋巴细胞是免疫系统的主要组成部分，不仅参与体液免疫，也参与细胞免疫。鉴于国内对T淋巴细胞增龄性变化研究较少，本文主要综述小鼠衰老过程中，不同月龄小鼠T淋巴细胞亚群的数量和功能的变化。整理发现，小鼠成年之后，CD4⁺T淋巴细胞在胸腺、外周血和脾脏中均发生增龄性的减少，CD8⁺T细胞则仅在胸腺中发生增龄性的减少，而在外周血和脾脏中发生增龄性的增加，但两者都会出现一定的功能障碍，其中包括增殖能力和免疫功能。
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  免疫炎症在皮肤创伤中的作用及研究进展

  黄建，黄功华，刘新光，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 158-161.

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  组织损伤后出现炎症反应不可避免。越来越多的证据显示炎症反应在皮肤损伤后内稳态的重建中至关重要，并且特异性的炎性细胞亚群及其分泌的细胞因子相互作用形成的网络直接影响角质形成细胞的增殖，进而影响组织修复。近年来发现皮肤中过度的炎症反应会延迟创伤愈合，而在创伤微环境作用下皮肤的角质形成细胞亦会加重炎症反应。因此深入了解组织修复时控制炎症反应的机制以及炎症反应怎样直接影响愈合过程非常重要。本文将对近期皮肤组织修复时控制炎症反应潜在的细胞及分子机制作一简要综述。
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  Notch信号通路调控调节性T细胞分化与功能的研究进展

  张悦，马蕾，薛海波，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 162-165.

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  Notch信号通路在进化上十分保守，通过介导细胞之间的相互作用贯穿于机体的各项生命活动，精细地调控生长、发育、凋亡等过程的进行。调节性T细胞是一类表型和功能特异的T细胞亚群，通过与靶细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子的方式在维持机体免疫稳态中起重要作用。本文重点对Notch信号通路调控调节性T细胞分化与功能的研究进展进行综述。
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  代谢免疫学：新兴的前沿

  刘震超，夏菲菲，周明爱，等

  现代免疫学. 2018, 38(2): 166-169.

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  代谢和免疫是机体生存最基本的需求。在长期的进化过程中，各种生物都形成了代谢和免疫反应的共同通路。因此，免疫反应和代谢调节高度统一，功能上相互依赖，这种免疫和代谢之间的相互作用可以被看作机体稳态调节的核心机制。代谢免疫学就在代谢和免疫相互联系的基础上研究免疫与代谢之间相互作用的途径、模式及其调控的一门新兴学科，并在此基础上更好地了解相关疾病的病理机制,探讨新的治疗方法。代谢免疫学的全新时代正在到来。
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  免疫检查点抑制剂及联合放疗对肿瘤治疗的进展

  赵磊，方芳，陈琪

  现代免疫学. 2018, 38(2): 170-174.

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  放疗一直是恶性肿瘤的重要治疗手段之一，但是肿瘤的放疗抵抗却非常普遍，常常导致治疗失败。近几年来肿瘤免疫疗法进展迅速，免疫检查点抑制剂抗肿瘤效果令人瞩目。研究发现放疗联合应用免疫检查点抑制剂可产生抗肿瘤协同作用，甚至使对单一治疗抵抗的肿瘤转为对联合治疗敏感。本文对相关研究进行综述，为未来的临床应用提供思路。
简讯
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  《现代免疫学》稿约

  现代免疫学. 2018, 38(2): 175-176.

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  Richard Flavell院士莅临报告

  现代免疫学. 2018, 38(2): 177.

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