2021年, 第41卷, 第4期　刊出日期：2021-07-30

  

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论著
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  感染伯氏疟原虫小鼠外周血淋巴细胞及其表面分子的检测

  郑贵星，陈冰霞，张梦欣，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 265-271.

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  为探讨C57BL/6小鼠在感染伯氏疟原虫（Plasmodium berghei）后外周血中的免疫细胞及其表面分子变化情况，将C57BL/6小鼠分为感染组和对照组(n=5)，分别尾静脉注射伯氏疟原虫混悬液和生理盐水；感染第6天（Day 6, D6)处死小鼠，取外周全血并制备免疫细胞悬液；FACS检测小鼠B细胞、T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞百分比及其表面分子CXCR3、CD69、CD62L表达水平变化情况。结果显示，疟原虫感染后，小鼠外周血B细胞百分比与对照组相比显著降低［（7.28±0.57）% vs （44.49±4.31）% ，P＜0.01］，而T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞百分比与对照组相比变化不显著［（33.26±6.65）% vs （35.99±3.45）%、（17.86±5.34）% vs （14.61±3.86）%、（13.32±1.92）% vs （11.75±1.64）%，均P＞0.05］；感染组B细胞和T细胞中CXCR3表达水平显著高于对照组［（10.52±0.65）% vs （5.46±1.59）%、（25.44±5.67）% vs （12.45±0.23）%，均P＜0.05］，而NK细胞中CXCR3表达相比对照组显著降低［（2.33±0.23）% vs （5.42±1.37）%，P＜0.05］，CD8⁺T细胞中CXCR3表达水平高于对照组，但差异无统计学意义［（30.13±6.40）% vs （21.29±0.60）%，P＞0.05］；在感染组T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞中CD69的表达水平显著高于对照组［（25.89±1.89）% vs （1.68±0.56）%、（20.43±3.91）% vs （2.34±1.05）%、（34.58±1.67）% vs （5.28±1.04）%，均P＜0.001］，而在B细胞中该指标高于对照组，但差异无统计学意义［（38.83±2.24）% vs （15.29±15.12）%，P＞0.05］；在感染组B细胞、T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞中CD62L的表达水平相比对照组显著降低［（32.62±5.73）% vs （92.32±0.49）%、（2.60±0.50）% vs （76.33±8.34）%、（1.80±0.51）% vs （88.07±2.63）%、（0.25±0.06）% vs （14.69±2.37）%，均P＜0.001］。综上，感染组小鼠外周血B细胞减少，B细胞和T细胞CXCR3表达水平升高，而NK细胞表达水平减少，T细胞、CD8⁺ T细胞和NK细胞高表达CD69，而感染组B细胞、T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞低表达CD62L。这提示感染伯氏疟原虫后，小鼠的免疫应答处于低水平，可能机制是下调免疫细胞的CD62L表达水平。
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  Spata2-CYLD去ASC线性泛素化抑制NLRP3炎症小体活化

  吴丹丹，蒋小丽，张双艳，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 272-277.

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  含NACHT-LRR-PYD结构域蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3, NLRP3）炎症小体是由NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC)和Caspase-1组装成的多蛋白复合物，能够诱导IL-1β的成熟与分泌，促进炎症反应发生。它的异常活化可导致多种炎症性疾病。已有研究表明，ASC线性泛素化对炎症小体活化至关重要，但是它是否受去泛素化作用调控尚不清楚。课题组最近研究显示，精子发生相关蛋白2（spermatogenesis-associated protein 2, Spata2)与圆柱瘤蛋白（cylindromatosis tumor suppressor protein, CYLD)组成的去泛素化酶复合物通过去泛素化NLRP3炎症小体上游调节蛋白Polo样蛋白激酶4（Polo-like kinases 4, PLK4)抑制炎症小体活化。研究进一步发现，Spata2-CYLD还可去除ASC的线性泛素化，并确定了泛素化位点及其对ASC活化炎症小体功能的重要性。机制研究显示Spata2-CYLD与ASC在细胞中共定位，并且通过NLRP3蛋白结合至炎症小体发挥去泛素化ASC的作用。研究首次鉴定到ASC的去泛素化酶，揭示了Spata2-CYLD调控NLRP3炎症小体活化的又一新机制，为NLRP3炎症小体活化的调控机制提供了新认识。
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  大电导钙依赖性钾通道对LPS诱导THP-1来源巨噬细胞免疫活性的影响

  方均燕，宋阿会，刘英莉

  现代免疫学. 2021, 41(4): 278-283.

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  为鉴定人单核细胞系THP-1中大电导钙依赖性钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channel，BKca)蛋白的表达及其对THP-1细胞活性、极化及细胞因子分泌功能的影响，用佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）诱导人单核细胞系THP-1，使其成为具有贴壁能力的巨噬细胞，用Western blotting检测BKca蛋白的表达，先后应用LPS和BKca特异性抑制剂影响巨噬细胞上BKca的活性，用CCK-8检测细胞活性的变化，流式细胞仪检测巨噬细胞表型极化情况，qRT-PCR检测细胞因子mRNA（TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10）的表达。结果显示，Western blotting检测到人单核细胞系THP-1来源的巨噬细胞上存在BKca的表达，随着BKca特异性抑制剂浓度的增加，细胞活力明显降低（P<0.05）。应用LPS和BKca特异性抑制剂，可抑制BKca的表达，降低M1标志物CD80的表达，促进M2标志物CD206的表达（P<0.05），同时降低其分泌的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平，促进抑炎因子IL-10的分泌（P<0.05）。该研究提示，BKca参与LPS诱导的巨噬细胞的早期活化及M2/M1亚型的极化，介导炎症反应的发生、发展，可能是抗炎治疗的潜在靶点。
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  免疫特征在幼年特发性关节炎和川崎病患儿鉴别诊断中的意义

  杨冬节，岳玉林，李松涛，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 284-288.

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  为评价免疫学检测指标在幼年特发性关节炎(juvenile idiopathic arthritis，JIA)和川崎病（Kawasaki disease，KD）患儿鉴别诊断中的意义，选择JIA患儿68例、KD患儿113例作为研究对象，另选择68例健康儿童作为对照组。分别检测患儿治疗前及对照组儿童细胞免疫（CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD16⁺CD56⁺NK细胞、CD19⁺B细胞、CD4⁺/ CD8⁺比值）水平、体液免疫（IgG、IgM、C3、C4）水平、炎性因子（IL-10、IL-6、TNF-α和sIL-2R）水平，同时检测各组外周血白细胞（white blood cell，WBC）、血红蛋白（hemoglobin，Hb）、血小板（platelet，PLT）、CRP水平。结果显示，JIA组和KD组WBC计数、CRP水平明显高于对照组（P<0.05）；JIA组和KD组C3、C4、IgG水平显著高于对照组（P<0.05），其中KD组水平最高；KD组CD8⁺T细胞水平低于对照组（P<0.05），CD19⁺B细胞水平明显高于对照组及JIA组（P<0.05），JIA组和KD组CD16⁺CD56⁺NK细胞水平均低于对照组（P<0.05）；JIA组和KD组所有炎性因子指标均高于对照组（P<0.05）；多因素Logistic回归分析和ROC曲线结果显示，鉴别诊断JIA和KD最有效的单项免疫学指标是C3，其AUC为0.850，多指标联合鉴别诊断JIA和KD的AUC为0.954。该研究提示，联合多项免疫学指标检测可以为临床早期鉴别诊断JIA和KD提供参考依据。
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  miR-142-5p通过负调控M2型肿瘤相关巨噬细胞中HGF的表达抑制非小细胞肺癌细胞的增殖

  杨超，刘贝，魏微，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 289-296.

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  为探究miR-142-5p在M2型肿瘤相关巨噬细胞（M2 tumor-associated macrophage，M2-TAM）中的表达特点及其对非小细胞肺癌细胞增殖的调节作用，采用IL-4刺激正常巨噬细胞（macrophage，M）诱导出M2型巨噬细胞（M2 macrophage，M2-M）；通过Transwell系统将M与小鼠肺癌Lewis细胞共培养，得到普通肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）和M2-TAM，采用RT-PCR和FACS检测IL-4刺激组和共培养组细胞中CD206和CD163的表达。以RT-PCR、ELISA检测2组细胞中miR-142-5p和肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）的表达，用TargetScan和荧光素酶活性试验检测miR-142-5p和HGF的靶向关系；分别采用miR-142-5p模拟物和抑制剂成功构建miR-142-5p过表达和低表达细胞模型，用RT-PCR、ELISA检测细胞中HGF、TGF-β、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和IL-10的表达，用CCK-8检测细胞增殖情况；采用HGF拮抗剂下调HGF的表达，用CCK-8检测细胞增殖情况。结果显示，与M和TAM相比，在M2-M和M2-TAM中CD206和CD163的表达水平升高（P<0.001）。与M和TAM相比，miR-142-5p在M2-M和M2-TAM中的表达显著下调（P<0.001），而HGF显著上调（P<0.001），miR-142-5p可以靶向负调节HGF的表达；过表达miR-142-5p抑制了M2-TAM中HGF、TGF-β、VEGF、IL-10的表达，同时抑制非小细胞肺癌细胞的增殖，而低表达miR-142-5p具有相反的效应；低表达HGF抑制了非小细胞肺癌细胞的增殖。该研究提示，miR-142-5p可以通过靶向负调控HGF抑制非小细胞肺癌细胞的增殖。
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  外周血T细胞及双阴性T细胞在结直肠癌患者中的变化及临床意义

  孙克娜，陈英剑，宋御繁，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 297-301.

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  为探讨外周血T细胞及双阴性T细胞(double-negative T cell，DNT)在结直肠癌（colorectal cancer，CRC）患者中的变化及临床意义，收集93例初次就诊的CRC患者(其中55例行CRC根治术)外周血，同时收集54例体检中心健康者的外周血。采用FACS检测T细胞亚群及DNT比例，分析CRC患者及其不同临床分期和手术切除肿瘤后外周血DNT比例和免疫状态的变化。结果显示，与健康组比较，CRC患者CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞比例显著降低(P＜0.05)，DNT比例显著升高(P＜0.05)；与术前比较，患者术后CD3⁺CD4⁺T细胞比例显著升高（P＜0.05），而DNT比例显著降低（P＜0.05）；与早期患者比较，晚期患者DNT比例显著降低（P＜0.05）。该研究提示，CRC患者外周血T细胞亚群表达紊乱，其中DNT显著增加，与CRC发生、发展有关。DNT有望成为CRC患者免疫状态临床监测的指标，这为进一步完善CRC患者的诊断和预后评估提供了实验依据。
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  过敏性鼻炎机体中Th9变化及相关因子表达的研究

  何玮，梁兴明，胡敏，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 302-306.

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  为探讨过敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）对机体Th9变化及相关细胞因子表达的影响，收集2018年1月至12月于南宁市第二人民医院就诊的AR患者46例为病例组，同期健康体检者12例为健康组，采集两组研究对象血清，检测IL-9、IL-4和TGF-β1表达水平。取C57BL/6小鼠6只，采用随机数字表法分为模型组和对照组（n=3），建立卵清蛋白（ovalbumin, OVA)致敏的AR小鼠模型，根据鼻部症状学评分判定模型构建是否成功。qPCR检测各组小鼠鼻黏膜组织中PU.1、IRF-4、IL-9、IL-4和TGF-β1转录水平;FACS检测小鼠外周血Th9百分比。结果显示，与健康组比较，病例组血清样本中IL-9、IL-4和TGF-β1的表达水平显著升高（均P＜0.01）；在小鼠模型中，与对照组相比，模型组小鼠鼻黏膜组织中PU.1、IRF-4、IL-9、IL-4和TGF-β1 mRNA表达水平显著升高（均P＜0.05），Th9百分比也显著升高（P＜0.05）。由此，Th9及相关炎性因子在AR疾病发生发展过程中可能发挥一定作用。
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  TXNIP/NLRP3在脓毒症所致ALI/ARDS患者外周血中的表达

  黄钟，孙洁，姚振滨，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 307-312.

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  为探讨硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin interacting protein, TXNIP)/NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3, NLRP3)炎症小体通路在急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）发病机制中的作用，收集2017年1月—2018年12月因脓毒症导致急性肺损伤（acute lung injury， ALI）/ARDS重症住院的患者及同期健康体检者各40例为研究对象，其中病例组按照采血时间分为治疗D0、D3、D7组。采用qRT-PCR测定研究对象PBMC中NLRP3和TXNIP mRNA表达水平，同时采用Western blotting测定PBMC中NLRP3和TXNIP的蛋白表达水平。结果显示,病例治疗D0组、D3组、D7组的TXNIP、NLRP3 mRNA和TXNIP、NLRP3蛋白表达水平均显著高于对照组（均P＜0.05）；病例治疗D7组TXNIP 、NLRP3 mRNA表达水平较治疗D0组显著降低（均P＜0.05）；治疗D3组的TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平较治疗D0组显著降低（均P＜0.05）；病例组TXNIP、NLRP3 mRNA水平均与序贯器官衰竭估计评分（sequential organ failure assessment，SOFA）呈正相关（r≥0.782）。由此，TXNIP/NLRP3炎症小体通路可能参与脓毒症所致ALI/ARDS的发生、发展。
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  原发性肝癌TACE对外周血髓源性免疫抑制细胞百分比的影响

  邵明亮，张巍，苗同国，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 313-319.

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  为探讨肝细胞癌细胞增殖、临床分期、肝内转移以及经导管动脉栓塞化疗（transcatheter arterial chemoembolization， TACE）与髓源性免疫抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell， MDSC）百分比的关系，收集2011年5月—2015年1月于石家庄市第五医院就诊的237例HBV相关原发性肝癌患者的临床资料，依据治疗方式分为TACE组(n=124)和非TACE组(n=113)，分别于术前、术后采集患者外周静脉血检测G-MDSC（CD33⁺/CD15⁺/HLA-DR^low/CD11b⁺），分析其百分比是否存在差异。结果显示，巴塞罗那临床肝癌（Barcelona Clinic Liver Cancer， BCLC）分期B组MDSC (22.03%)显著高于BCLC分期A组（14.12%）（P＜0.05）；肿瘤转移组MDSC百分比显著高于非转移组（21.03% vs 5.10%，P=0.011）；肿瘤长径≥5 cm组（27.53%）高于＜5 cm组（8.64%）（P＞0.05）；多发肿瘤组（19.21%）高于单发组（11.69%）（P＞0.05）；血管侵犯组（26.15%）高于非血管侵犯组（7.38%）（P＜0.05）；非TACE组MDSC（34.00%)高于TACE组（25.90%）（P＜0.001）；门静脉瘤栓组（13.41%）高于非瘤栓组（9.33%），但差异无统计学意义（P＞0.05）。多因素分析结果显示BCLC分期、治疗方式是显著影响MDSC百分比的因素（均P＜0.05）。对TACE治疗组124例患者的生存率进行为期24个月的观察，发现MDSC≥24.21%组与＜24.21%组生存率差异显著（P＜0.05）。由此，MDSC的百分比与肝癌BCLC分期等有关，TACE可显著降低MDSC百分比，后者与患者术后生存率有关。综上，针对MDSC的监测有助于提示肝癌的临床进展和疗效。
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  骆驼奶对TNBS诱导的小鼠急性肠炎的保护作用

  崔畅婉，于淼，吴思，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 320-324.

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  为探讨骆驼奶对2,4,6-三硝基苯磺酸（trinitro-benze-sulfonic acid，TNBS）诱导的小鼠急性肠炎的保护作用及相关机制，将24只6～8周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为两组，实验组使用骆驼奶灌胃，对照组使用双蒸水灌胃，TNBS灌肠构建急性结肠炎模型。FACS检测免疫细胞百分比，ELISA测定细胞因子含量。结果显示，实验组小鼠比对照组体质量下降缓慢，组织学评分低，CD11b⁺Gr1⁺细胞百分比升高，CD8⁺ T细胞百分比下降，IL-17⁺ CD4⁺T细胞百分比降低，细胞培养上清液中IL-17水平降低，IL-10水平升高。由此，骆驼奶对TNBS诱导的小鼠急性肠炎具有保护作用，可能与免疫调节有关。
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  维生素D辅助治疗学龄前儿童支气管哮喘的临床效果及作用机制

  孙磊，管国涛

  现代免疫学. 2021, 41(4): 325-330.

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  为探讨维生素D辅助治疗学龄前儿童支气管哮喘的临床效果及作用机制，收集2014年6月—2017年12月在禹城市人民医院就诊的262例支气管哮喘患儿，按随机数字表法分为治疗A组132例和治疗B组130例。A组按GINA方案采用布地奈德混悬液雾化治疗；B组在此基础上口服星鲨维生素D滴剂，1粒/d，共治疗3个月。检测血清25-（OH）-D3、IgE、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（eosinophilia cationic protein， ECP）、IgA、IgM、IgG及肺功能指标，观察疗效。治疗A组和B组分别有129例和128例完成全部治疗和随访复查，其中轻、中、重度哮喘患儿的血清25-（OH）-D3、IgE及ECP水平之间差异显著(均P＜0.05)；治疗后B组患儿的25-（OH）-D3水平显著高于同期A组（均P＜0.05）；B组患儿ECP、IgE水平相比同期A组显著降低，且FVC、PEF及FEV1指标改善情况显著优于A组（均P＜0.05）。在治疗过程中，B组的喘息消失时间、咳嗽和哮鸣音消失时间及3个月内哮喘发作次数均显著少于A组（均P＜0.05）。治疗3个月后，治疗B组的血清免疫球蛋白水平显著高于治疗A组（均P＜0.05）。Spearman相关性分析显示，两组支气管哮喘患儿的25-（OH）-D3水平与喘息消失时间、咳嗽和哮鸣音消失时间及发作次数均呈显著负相关。由此，维生素D辅助治疗学龄前儿童支气管哮喘能够有效减轻症状，提高肺功能，减少哮喘发作次数，可作为儿童支气管哮喘的重要辅助治疗手段。
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  一种国产PD-L1诊断试剂盒与进口同类产品的临床一致性比对研究

  杭红，任丽娜，施丽君

  现代免疫学. 2021, 41(4): 331-335.

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  为研究PD-L1在宫颈癌（cervical cancer，CC）组织中的表达情况，并分析国内外PD-L1检测试剂结果的一致性，采用多中心研究，收集2019年5月—2020年7月于河南省肿瘤医院、河南省人民医院和中国科学院大学附属肿瘤医院（浙江省肿瘤医院）病理科接收的CC患者样本共1 102例，使用国产PD-L1（WD160）试剂盒以及美国丹科北美有限公司PD-L1（22C3）试剂盒分别对组织样本进行PD-L1免疫组织化学染色，统计不同肿瘤分期CC患者组织中PD-L1的阳性率。结果显示：（1）两种PD-L1试剂盒在CC组织中的表达阳性符合率为100.00%，阴性符合率为83.81%，总符合率为96.42%，K值为0.889 6（P＜0.05）；（2）国产PD-L1(WD160)试剂盒检测阳性率在Ⅰ、Ⅱ期CC患者中没有显著差异，但在Ⅲ期患者中显著降低（P=0.03, P=0.005， P总=0.015）。因此，国产PD-L1(WD160)试剂盒能够有效识别CC组织PD-L1阳性患者，可用于肿瘤免疫抑制剂类药物的伴随诊断。另外，PD-L1阳性率在不同肿瘤分期中的差异提示肿瘤微环境在疾病发生不同时期的变化，这种变化可能对CC的免疫治疗效果产生影响。
综述
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  新型细胞因子IL-29在自身免疫性疾病中的作用

  苗正月，冯小可，丁炜，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 336-340.

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  IL-29是新发现的Ⅲ型干扰素λ（IFN-λ）家族成员，是一种新型细胞因子。它主要由成熟的DC和巨噬细胞产生，具有抗病毒及抗肿瘤细胞增殖活性。先前关于IL-29的研究主要集中在肿瘤领域，近几年的研究发现，IL-29在免疫调节和炎症反应中同样具有重要作用，特别是与自身免疫性疾病的发病机制密切相关。该文就IL-29在自身免疫性疾病中的作用机制进行综述，以期为IL-29在自身免疫性疾病中作用的研究提供思路。
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  HOPX在肿瘤中的研究进展

  刘春梅，刘义庆，鞠瑛，等

  现代免疫学. 2021, 41(4): 341-344.

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  恶性肿瘤严重危害人类生命健康，近年来研究认为同源域蛋白同源盒（homeodomain-only protein homeobox， HOPX）基因是一种新的抑癌基因，其甲基化程度与肿瘤的发生发展关系密切。然而，HOPX在不同肿瘤中的作用仍不十分明确，有待进一步研究探索。该文以HOPX在肿瘤中的最新研究进展为基础，就其在肿瘤中的表达、功能及相关机制作一综述，为其在肿瘤领域的深入研究和应用提供参考。
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  miRNA在系统性红斑狼疮患者T细胞中的作用及机制研究

  杨晓兰，石力予，钱钧

  现代免疫学. 2021, 41(4): 345-348.

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  miRNA为内源性非编码RNA，具有调控基因表达的能力，参与疾病过程。系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种女性多发的全身性自身免疫性疾病，具有先天性免疫异常和获得性免疫异常的特点，其中T细胞功能异常在SLE的发病机制中发挥重要作用。研究发现，miRNA在SLE患者T细胞中存在差异表达并可调节T细胞功能。该文综述了miRNA在SLE患者T细胞中的作用及机制研究现状，明确miRNA在SLE发生、发展中的重要作用。
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  特异性促炎症消退介质在炎症反应中的作用研究进展

  李梦，李国忠，钟镝

  现代免疫学. 2021, 41(4): 349-352.

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  特异性促炎症消退介质（specialized pro-resolving lipid mediator，SPM）在炎症中可使多种免疫细胞功能转变，从而加速炎症的消退。研究发现，SPM家族中消退素（resolvin，Rv）、脂氧素（lipoxin，Lx）和保护素等在多发性硬化（multiple sclerosis，MS）中发挥着类似的促炎症消退作用，与疾病活动性和严重程度等相关。SPM可通过口服补充，有望成为MS或其他炎症性疾病的治疗新靶点。该文对近年来SPM在炎症过程中的作用及其与MS的相关研究进行综述。