2024年, 第44卷, 第4期　刊出日期：2024-07-30

  

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论著
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  泛癌中分析PVR基因对免疫细胞浸润及患者预后的影响

  荣耀, 张癸乾, 唐明政, 赵夏爽, 蔡辉, 安池冰

  现代免疫学. 2024, 44(4): 281-294.

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  脊髓灰质炎病毒受体(poliovirus receptor, PVR)基因与肿瘤的发生发展密切相关，然而PVR在肿瘤免疫中的调控作用及机制尚未阐明。研究从泛癌角度分析PVR在不同类型癌症组织中的表达及与患者预后和免疫水平的关联。通过癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA)和TIMER数据库完成了PVR在癌症和正常组织中表达差异的分析，利用生存分析工具评估了PVR与癌症患者预后的关联。通过TIMER数据库和R软件包评估了PVR在泛癌中与免疫细胞浸润、免疫检查点(immune checkpoint, ICP)基因的共表达关系及癌症基质/免疫评分。为进一步了解PVR基因在不同癌症中的潜在生物学作用机制，对PVR进行了单细胞水平测序分析和基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis, GSEA）；通过qRT-PCR对PVR在多种癌症细胞系中的表达进行验证。结果显示，PVR在肿瘤组织与正常组织中表达具有显著差异，如膀胱尿路上皮癌、胆管癌、结肠癌、食管癌和头颈部癌等。PVR的异常表达与多种癌症的不良预后有关，如肾上腺皮质癌、膀胱尿路上皮癌、乳腺癌和宫颈癌等。PVR的表达水平与泛癌中免疫细胞浸润、基质/免疫评分和ICP基因的表达调控显著相关(均P＜0.05，具体见正文)。单细胞测序结果显示，PVR与肿瘤细胞的分化、基因沉默和DNA修复等多种细胞生物学功能和表型有关。GSEA结果发现，PVR与多种肿瘤细胞的免疫相关功能和信号通路有关。qRT-PCR结果显示，相较于健康细胞，PVR在胃癌、结肠癌和肝癌细胞系中表达较高。较全面的泛癌分析表明，PVR是一种癌症组织中高表达并导致较差预后的癌基因，PVR可能是新的免疫依赖的预后预测标志物，能为癌症的靶向治疗提供新方向。
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  DNMT1基因沉默增强NK-92对Jurkat细胞杀伤作用及其机制

  武坤, 马晓波, 程沈菊, 杨金荣, 贺振新, 郭翀

  现代免疫学. 2024, 44(4): 295-301.

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  为了探讨沉默DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1, DNMT1）增强NK-92对Jurkat细胞杀伤作用及机制，检测2020年1月-2021年12月35例急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）患者骨髓标本的DNMT1水平。si-DNMT1被转染至NK-92细胞，并与Jurkat细胞共培养，乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）法检测对Jurkat细胞的杀伤作用，流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡及NKG2D膜表达。ELISA检测细胞因子IFN-γ水平，Western blotting测定NK-92细胞Syk、ZAP70、p-Syk、p-ZAP70、穿孔素、颗粒酶B表达。结果显示，ALL患者DNMT1水平明显高于对照组（P＜0.05）；DNMT1对ALL具有诊断价值（AUC：0.692，95%CI：0.533-0.851，P=0.033）。高DNMT1组患者PFS明显低于低DNMT1组患者（P＜0.05）。转染si-DNMT1后，NK-92细胞对Jurkat细胞杀伤率、Jurkat细胞凋亡率明显高于si-NC组（P＜0.05），分泌NKG2D，及表达穿孔素、颗粒酶B能力明显升高（P＜0.05）。si-DNMT1组NK-92细胞生成IFN-γ水平明显高于si-NC组（P＜0.05），其p-Syk、p-ZAP70明显高于si-NC组（P＜0.05）。综上，DNMT1在ALL中高表达，沉默DNMT1可增强NK-92细胞对Jurkat细胞杀伤作用，其机制可能与增强NK-92细胞记忆功能、激活Syk/ZAP70通路相关。
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  circ_0000885靶向miR-186调控胶质瘤细胞增殖、凋亡和迁移

  杨阳, 陈锋, 王志勇, 周达全, 朱耀祖, 张海泉

  现代免疫学. 2024, 44(4): 302-308.

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  为探讨环状RNA 0000885(circular RNA 0000885, circ_0000885)对胶质瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响和潜在机制。采用qRT-PCR分析正常脑组织和胶质瘤组织中circ_0000885和miR-186的表达。双荧光素酶报告实验验证circ_0000885和miR-186的靶向关系。将小干扰RNA阴性对照(si-NC)、circ_0000885的小干扰RNA(si-circ_0000885)、miRNA模拟物阴性对照(miR-NC)、miR-186模拟物、miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、miR-186抑制物(anti-miR-186)、si-circ_0000885+anti-miR-186分别转染胶质瘤细胞LN229。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、流式细胞术、Transwell实验检测circ_0000885和miR-186表达对LN229细胞活力、集落形成、凋亡和迁移的影响。裸鼠移植瘤实验检测移植瘤体积。结果显示，与正常脑组织比较，胶质瘤组织中circ_0000885的表达水平显著升高(P＜0.05)，miR-186的表达水平显著降低(P＜0.05)。干扰circ_0000885表达或过表达miR-186显著降低LN229细胞活力、集落形成数、迁移数(P＜0.05)，增加细胞凋亡率和miR-186表达水平(P＜0.05)，而抑制miR-186表达呈相反作用。抑制miR-186表达可显著减弱干扰circ_0000885表达对LN229细胞活力、集落形成、迁移、凋亡及移植瘤生长的影响(P＜0.05)。该研究提示，干扰circ_0000885通过靶向上调miR-186可抑制胶质瘤细胞增殖和迁移，诱导细胞凋亡。
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  上海市卡介苗接种人群外周抗原特异性 T 细胞免疫应答特征谱

  葛雷鸣, 吴彤, 梁宇硕, 包玉洁, 张晨星, 陈颖盈, 许洁

  现代免疫学. 2024, 44(4): 309-315.

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  为探究抗原特异性T细胞功能动态变化与卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin, BCG）保护时效的相关性，采用酶联免疫斑点法（enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT）和流式细胞术对上海地区健康志愿者外周抗原特异性CD4⁺T细胞应答水平进行评估。结果显示，IFN-γ水平随着个体年龄的增长而升高（P<0.05）；30岁以上人群分泌抗原特异性IFN-γ的CD4 效应T细胞（effector T cell, Teff）比例显著升高（P<0.01），同时18岁以上人群分泌IFN-γ的CD4记忆T 细胞（memory T cell, TM）比例显著下降（P<0.05）；成年人IL-17α⁺CD4⁺ T 细胞和CD4⁺Teff比例均显著高于青少年人群（P<0.01）；此外，18~29岁人群外周CD4⁺ 初始T细胞（naive T cell, TN）和CD4⁺ Teff以分泌IL-17α为主，而大于30岁的人群外周分泌IFN-γ的CD4⁺ TM比例下降（P<0.000 1），且二者趋向于平衡。上述结果提示，接种BCG后，个体随年龄增长其外周抗原特异性的Th1和Th17 Teff和TM格局发生变化，可能在抗结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）感染中发挥一定的保护作用。因此，设计特定的亚单位结核疫苗以加强长效免疫TM的保护性将对结核病的防控具有重要意义。
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  SOCS3通过TLR4/NF-κB通路促进高糖诱导的大鼠系膜细胞炎性因子表达

  王优, 肖玲, 尹青桥, 叶刚, 罗丹, 胡曼丽, 陈杰, 皮培

  现代免疫学. 2024, 44(4): 316-322.

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  为探讨细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3, SOCS3)对高糖(high glucose, HG)诱导的大鼠肾小球系膜细胞RMC炎性因子表达的影响及机制，将RMC细胞分为6组：正常对照(normal control, NC)组、渗透压对照(osmotic control, OSM)组、HG组、HG+TAK-242(TLR4抑制剂)组、HG+sh-SOCS3组和HG+sh-SOCS3+TAK-242组。CCK-8法检测细胞的存活率；流式细胞术检测细胞的凋亡情况；ELISA检测细胞培养上清液中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和COX2表达水平；qPCR法检测RMC细胞TLR4、NF-κB p65和IκB-α mRNA的相对表达水平；Western blotting检测RMC细胞TLR4、NF-κB p65、p-p65、IκB-α和p-IκB-α蛋白的表达量。结果显示，与NC组相比，HG组细胞存活率显著降低(P＜0.01)，细胞凋亡率，细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和COX2表达水平，细胞中TLR4、p65、IκB-α mRNA相对表达水平和TLR4、p-p65、p-IκB-α蛋白表达水平均显著升高(均P＜0.01)；与HG组相比，HG+TAK-242组和HG+sh-SOCS3组细胞存活率显著升高(均P＜0.05)，细胞凋亡率，细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和COX2表达水平，细胞中TLR4、p65、IκB-α mRNA表达水平和TLR4、p-p65、p-IκB-α蛋白表达水平均显著降低(均P＜0.05)；HG+sh-SOCS3+TAK-242组较HG+TAK-242组效果更加显著(均P＜0.05)。由此，SOCS3可通过促进TLR4/NF-κB信号通路的激活上调HG诱导的大鼠系膜细胞炎性因子表达，加重炎症反应。
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  小白菊内酯通过介导miR-141-3p/PDCD4通路改善LPS诱导的急性肺损伤

  张焕华, 胡珊, 于丽丽, 丁明罡, 李芳

  现代免疫学. 2024, 44(4): 323-331.

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  为探讨小白菊内酯（parthenolide, PTL）对LPS诱导的急性肺损伤（acute lung injury, ALI）的作用及其调控机制，给予C57BL/6小鼠单次气管内给药LPS（4 mg/kg）构建ALI小鼠模型，MLE-12细胞与1 μg/mL LPS孵育体外诱导细胞损伤。小鼠被随机分为4组：对照组、LPS组、LPS+5 mg/kg PTL组和LPS+10 mg/kg PTL组，每组10只。采用H-E染色观察肺组织病理学变化；收集肺组织测定肺组织湿重（wet weight, W）/干重（dry weight, D）比值；ELISA测定小鼠支气管肺泡灌洗液和细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6水平。miR-141-3p和程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4, PDCD4）水平分别通过qRT-PCR和Western blotting检测；细胞活力和凋亡分别通过CCK-8法和FACS检测。结果显示，与对照组比较，LPS组小鼠肺组织W/D比值及 TNF-α、IL-1β、IL-6、PDCD4水平升高（P<0.05），肺泡壁增厚，肺间质弥漫性出血和炎症浸润增加，肺组织病理评分升高（P<0.05），miR-141-3p表达降低（P<0.05）；与LPS组比较，LPS+5 mg/kg PTL组和LPS+10 mg/kg PTL组W/D比值及TNF-α、IL-1β、IL-6、PDCD4水平降低（P<0.05），肺泡壁增厚减轻，肺间质弥漫性出血和炎症细胞浸润减少，肺组织病理评分降低（P<0.05），miR-141-3p表达增加（P<0.05），且呈剂量依赖性；与对照组比较，LPS组细胞活力和miR-141-3p表达降低（P<0.05），细胞凋亡率及TNF-α、IL-1β、IL-6、PDCD4水平升高（P<0.05）；与LPS组比较，5和10 μmol/L PTL处理后，细胞活力及miR-141-3p表达增加（P<0.05），细胞凋亡率及TNF-α、IL-1β、IL-6、PDCD4水平降低（P<0.05），且呈剂量依赖性；此外，PDCD4被确定与miR-141-3p靶向结合。该研究提示，PTL可以通过调节miR-141-3p/PDCD4通路抑制炎症以缓解LPS诱导的ALI。
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  子宫内膜异位症病灶内NLRC3和FOXP3的表达及意义

  郝梦启, 姚佩佩, 姬佩雲, 刘莎莎, 张雅丽

  现代免疫学. 2024, 44(4): 332-338.

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  为探讨先天性免疫相关分子核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族胱天酶募集结构域蛋白3（nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family caspase recruitment domain containing 3, NLRC3）和免疫稳态基本转录因子叉头状蛋白3（forkhead box protein 3, FOXP3）在子宫内膜异位症（endometriosis, EMT）患者中的表达及临床意义。通过免疫组织化学、Western blotting和qRT-PCR方法检测22例Ⅲ期、18例Ⅳ期卵巢异位内膜组织和25例正常子宫内膜组织中NLRC3、FOXP3的表达水平，分析NLRC3、FOXP3表达与EMT临床病理特征的关系及NLRC3、FOXP3表达的相关性。结果显示，与正常子宫内膜组相比，NLRC3表达水平在Ⅲ期、Ⅳ期EMT组均降低，而FOXP3表达水平在Ⅲ期、Ⅳ期EMT组均升高。NLRC3、FOXP3的表达在Ⅲ期、Ⅳ期EMT组中差异无统计学意义。EMT患者中，CA125水平较高的组织中NLRC3表达阳性率更低，而FOXP3⁺细胞浸润数量更高，差异具有统计学意义（P<0.05），NLRC3表达与FOXP3⁺细胞浸润数量呈负相关（P<0.05）。NLRC3、FOXP3的表达在不同年龄、病灶大小、痛经程度中差异无统计学意义（P>0.05）。该研究提示，EMT的发病与腹腔微环境免疫失衡有关，通过干预NLRC3、FOXP3的表达靶向治疗EMT失调的免疫微环境是针对EMT新型治疗的潜在途径。
  
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  棕矢车菊素调节SIRT1/FoxO3信号通路对糖尿病肾病大鼠炎症反应的影响

  王亮, 刘安宁, 陈利灵, 郑宽勇, 李红玲

  现代免疫学. 2024, 44(4): 339-345.

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  为探讨棕矢车菊素对糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）大鼠炎症反应的影响，将SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、棕矢车菊素低（10 mg/kg）剂量组、棕矢车菊素高（20 mg/kg）剂量组、阳性对照组（500 mg/kg二甲双胍）、抑制剂组［20 mg/kg棕矢车菊素+5 mg/kg 沉默信息调节因子2相关酶1（silent mating-type information regulation 2 homolog 1, SIRT1）抑制剂EX-527］，每组12只。除对照组外，其他组大鼠均采用高脂饲料喂养联合化学诱导法构建DN大鼠模型，模型构建成功后，每天药物灌胃1次，持续4周。采用酶标仪检测末次给药后大鼠肾功能变化；ELISA检测大鼠血清炎性因子表达水平；H-E染色观察大鼠肾脏组织病变；免疫组化法检测大鼠肾脏组织足细胞裂孔膜蛋白Nephrin和膜蛋白Podocin表达；Western blotting检测大鼠肾脏组织中SIRT1/叉头状转录因子O3（forkhead box protein O3, FoxO3）信号通路相关蛋白表达。结果显示，与对照组比较，模型组大鼠肾脏组织间质炎性浸润明显，肾小球肥大，肾小管细胞空泡变性，肾功能减弱，血清炎性因子、FoxO3表达显著升高，Nephrin、Podocin、磷酸化SIRT1（phosphorylated SIRT1, p-SIRT1）/SIRT1表达水平显著降低（P<0.05）；与模型组比较，棕矢车菊素低、高剂量组和阳性对照组大鼠肾脏病变明显改善，肾功能增强，血清炎性因子、FoxO3表达显著降低，Nephrin、Podocin、p-SIRT1/SIRT1表达水平显著升高（P<0.05）；加入SIRT1抑制剂EX-527后，减弱了棕矢车菊素对DN大鼠炎症反应的抑制作用。该研究提示，棕矢车菊素可通过调节SIRT1/FoxO3信号通路缓解DN大鼠体内的炎症反应。
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  沉默circMET靶向miR-30a-5p/ITGβ3抑制人直肠癌细胞株SW1463侵袭和迁移的作用研究

  李萌, 高志寒, 于溯洋

  现代免疫学. 2024, 44(4): 346-352.

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  为探讨沉默环状核糖核酸MET（cyclic ribonucleic acid MET, circMET）靶向miR-30a-5p/整合素β3（integrin β3, ITGβ3）抑制人直肠癌细胞侵袭和迁移的作用，选取人直肠癌细胞株SW1463进行相关研究。将SW1463细胞分为si-NC组、si-circMET组、miR-NC组、miR-30a-5p组、si-circMET+anti-miR-NC组、si-circMET+anti-miR-30a-5p组，每组6个复孔。通过Transwell小室试验检测细胞侵袭和迁移能力；qRT-PCR及Western blotting检测circMET、miR-30a-5p表达及ITGβ3、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2, MMP-2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9, MMP-9）表达水平；双荧光素酶报告基因试验分别验证circMET与miR-30a-5p、miR-30a-5p与ITGβ3的靶向关系。结果显示，与si-NC组比较，si-circMET组侵袭和迁移细胞数目，circMET表达及ITGβ3、MMP-2、MMP-9 的mRNA和蛋白表达降低，miR-30a-5p表达升高（P＜0.05）；与miR-NC组比较，miR-30a-5p组侵袭和迁移细胞数目，circMET表达及ITGβ3、MMP-2、MMP-9 的mRNA和蛋白表达降低，miR-30a-5p表达升高（P＜0.05）；与si-circMET+anti-miR-NC组比较，si-circMET+anti-miR-30a-5p组侵袭和迁移细胞数目，circMET表达及ITGβ3、MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达升高，miR-30a-5p表达降低（P＜0.05）；双荧光素酶报告基因试验结果证实，circMET与miR-30a-5p、miR-30a-5p与ITGβ3之间有靶向调控关系。综上所述，沉默circMET可抑制人直肠癌细胞株SW1463的侵袭和迁移，可能是通过靶向miR-30a-5p抑制ITGβ3、MMP-2、MMP-9的表达实现的。
  
综述
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  蛋白激酶CK2调控肿瘤相关信号通路功能的研究进展

  张伟, 陈秋含, 陈广洁

  现代免疫学. 2024, 44(4): 353-357.

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  蛋白激酶CK2是一种高度保守的、普遍存在的蛋白激酶，具有磷酸化多种蛋白底物的功能，并参与多种信号通路的调控过程。CK2的表达失衡会导致多种信号通路的失调，与肿瘤的发生、发展密切相关。该文综述了CK2的组成、结构及其在肿瘤相关的重要信号通路中的调控作用，以期为进一步探究以CK2为靶标的肿瘤治疗策略提供依据。
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  B细胞在肿瘤免疫中作用的研究进展

  王安然, 郭富颖, 查皓然, 张元元

  现代免疫学. 2024, 44(4): 358-362.

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  B细胞是肿瘤微环境中的主要细胞成分，并且在肿瘤免疫中发挥重要作用。既往的研究更多认为B细胞及其产生的抗体能够分别通过分泌免疫抑制性细胞因子和激活补体系统等机制促进肿瘤进展。然而近来的研究显示，B细胞在促进抗肿瘤免疫应答中发挥了重要的作用。文章综述B细胞在肿瘤免疫中的多种作用，讨论其不同效应的内在机制及其对肿瘤患者预后的影响。
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  性激素在干燥综合征中的研究进展

  卡玉秀, 刘维, 郭小静

  现代免疫学. 2024, 44(4): 363-368.

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  性激素是由性腺和肾上腺产生或由其他物质转化而来的类固醇激素。干燥综合征(Sjogren's syndrome, SS)是一种由淋巴细胞介导的慢性进行性系统性自身免疫病，主要累及外分泌腺，其病因复杂，发病机制尚未完全阐明。女性发病率比男性高，这提示性激素和SS发生、发展之间存在关联。该文分析雌激素、雄激素和催乳素对SS的作用机制的影响，为深入了解SS的发病机制及探究其治疗方法提供参考。
简讯
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  《现代免疫学》稿约

  《现代免疫学》编辑部

  现代免疫学. 2024, 44(4): 368.

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