现代免疫学

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巨噬细胞极化影响前列腺癌细胞的促血管形成能力

徐璐，胡银英，余艳荣，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 177-183.

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研究巨噬细胞极化对人前列腺癌PC-3细胞促血管形成的作用，并探讨其机制。本实验成功诱导正常男性外周血单核细胞为M0、M1、M2和TAM，发现它们在形态学上差异明显。ELISA检测各亚型巨噬细胞条件培养液(condition medium，CM)表明：TGF-β 在 TAM中显著高于其他亚型，IL-10高表达于M2 及 TAM，而IL-12在M1中高表达(P < 0.05)。RT-PCR结果表明： IL-6、IL-23与 CXCL9 在 M1中表达显著增高(P < 0.05)，以及miRNA let-7b 、let-7c比TAM表达显著增高(P < 0.01)。体外血管形成实验结果显示M2、TAM能增强PC-3细胞的促血管形成(P < 0.01)。因此，TAM亚型巨噬细胞促进PC-3细胞的血管形成机制可能与miRNA let-7b、let-7c高表达以及上述细胞因子的差异性表达有关。

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HMGB1及TLR2在多发性硬化患者外周血单核细胞中的表达及其作用

刘彩云，郭利芳，韩金荣，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 184-187.

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通过检测高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1， HMGB1)及Toll样受体2(toll like receptor 2， TLR2)在多发性硬化(multiple sclerosis， MS)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell， PBMC)中的表达变化及血清中单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1， MCP-1)、IL-17分泌变化，初步探讨HMGB1及TLR2在MS发病中可能的免疫学作用。应用流式细胞术检测MS患者组、健康对照组人群PBMC中HMGB1及TLR2蛋白的相对表达并采用Pearson相关分析观察两者表达的相关性；应用ELISA法检测两组人群血清中MCP-1、IL-17分泌水平。MS组HMGB1、TLR2蛋白的相对表达及MCP-1、IL-17分泌水平较对照组明显上调(P < 0.01)，HMGB1蛋白与TLR2蛋白表达呈正相关(r = 0.893，P < 0.01)。HMGB1可能会通过其受体TLR2启动下游炎性信号传导通路，参与MS免疫损伤过程。

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ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c辅助诊断结核病的初探

刘振华，孙妍，夏凡，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 188-191.

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用酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay， ELISPOT)评估新型复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c在活动性肺结核病诊断中的临床价值。选取初治肺结核患者血常规标本50例和健康体检者血常规标本40例，分别作为结核组和健康对照组，分离PBMC，应用新型复合ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c与ESAT-6/CFP-10融合蛋白作为抗原对受试者标本进行ELISPOT实验，检测两者斑点形成的细胞数量并进行比较。结果显示，复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c与ESAT-6/CFP-10融合蛋白检测结核分枝杆菌感染的阳性率依次为86%(43/50)、82%(41/50)，特异度依次为82.5%(33/40)、85%(34/40)。研究表明，应用新型复合蛋白ESAT-6/CFP-10/Rv3425/Rv3248c作为抗原建立的ELISPOT法辅助诊断结核病具有较高的潜在应用价值。

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TIM-3在胃癌肿瘤浸润γδT细胞与NK细胞中的表达及其临床意义

徐娟俐，石亮荣，蒋敬庭，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 192-197.

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检测T细胞免疫球蛋白及黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules 3 ，TIM-3)在胃癌患者固有免疫细胞(γδT细胞与NK细胞)中的表达率，探讨其与临床病理特征及术后中位无进展生存期(progress free survival， PFS)的关系。收集临床病理资料齐全的胃癌患者26例，经流式细胞技术检测TIM-3在胃癌组织、癌旁组织及外周血γδT细胞、NK细胞中的表达率，并分析其与临床病理因素及中位PFS的相关性。结果发现，TIM-3在胃癌组织和癌旁组织中γδT细胞上均表达，而2类组织中γδT细胞上TIM-3的表达率差异无统计学意义(P=0.074)，但均显著高于其在外周血γδT细胞上的表达水平(P<0.001；P<0.001)。TIM-3在外周血NK细胞中表达率较高，且TIM-3在外周血中NK细胞表达率显著高于胃癌组织及癌旁组织(P<0.001；P<0.001)，而癌组织与癌旁组织之间差异无统计学意义(P=0.097)。NK细胞中TIM-3的表达率分别与肿瘤浸润深度和TNM分期相关(P<0.01)，γδT细胞中TIM-3表达率与TNM分期有关(P<0.01)。γδT细胞及NK细胞中TIM-3表达率较低的胃癌患者比TIM-3表达率较高的胃癌患者的中位PFS更长(P=0.014；P=0.028)，提示TIM-3在胃癌的进展过程中起到重要作用。

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抗结核治疗中特异性T细胞免疫反应动态分析及其临床意义

吴家宝，陈颖盈，季萍，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 198-205.

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目前，抗结核的化疗方案包括2个月的强化期与4个月的巩固期，而治疗过程中特异性细胞免疫应答随细菌载量改变呈现的动态变化特征有可能成为治疗疗效的生物标志物，并为个性化治疗方案提供理论依据。为此，我们收集了9例活动性结核病患者治疗前, 治疗2、4、6个月的外周血样本，采用酶联免疫斑点测定法(enzyme-linked immune spot assay， ELISPOT)测定了不同治疗阶段结核特异性抗原ESAT-6和CFP-10刺激下PBMC中分泌IFN-γ的细胞数量，同时分析了抗原特异性Th1型细胞因子分泌水平以及多功能T细胞比例的动态变化特征。结果显示：随着治疗的深入，ESAT-6及CFP-10刺激患者PBMC后，释放IFN-γ的细胞数量显著下降(P < 0.05)。CD4+IFN-γ+ T淋巴细胞的比例在治疗前与治疗6个月时相比有下降趋势，且治疗后结果具有归一性；虽然多功能T细胞有重要抗结核作用，但在我们统计的患者治疗过程中的变化不明显。以上结果表明抗结核治疗过程中外周淋巴细胞抗原特异性释放IFN-γ的细胞数量与CD4+IFN-γ+ T淋巴细胞的比例随着患者的病情好转呈现下降趋势，提示抗原特异性细胞免疫应答的动态变化谱与病原菌负荷下降存在密切关系，可能成为抗结核治疗过程中的免疫学标志物。

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瓜氨酸化α-烯醇化酶特异性单克隆抗体制备及其在阿尔茨海默病动物模型中的检测应用

韩魏巍，胡梦蝶，苏伊玲，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 206-211.

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本研究利用杂交瘤技术制备瓜氨酸化α-烯醇化酶特异性单克隆抗体，并探究瓜氨酸化α-烯醇化酶抗体在检测阿尔茨海默病(AD)动物模型中的作用。利用生物信息学软件分析预测α-烯醇化酶的B细胞优势表位，选取9R-25F位氨基酸序列，将该表位多肽中2个精氨酸替换为瓜氨酸，化学合成瓜氨酸化α-烯醇化酶9R-25F多肽(citrullinated α-enolase peptide，CEP)。采取活泼酯法将CEP多肽与BSA偶联制备CEP-BSA偶联抗原并免疫BALB/c小鼠，杂交瘤技术制备CEP单克隆抗体。免疫组织化学和Western blotting对其特异性进行验证。CEP-BSA偶联抗原免疫小鼠能诱发特异性抗体反应，经细胞融合、筛选得到一株稳定分泌CEP特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为9B5。Western blotting分析显示该单克隆抗体能特异性结合瓜氨酸化α-烯醇化酶，免疫组织化学检测显示9B5单抗能结合AD模型大鼠脑组织细胞上瓜氨酸化的α-烯醇化酶。本研究成功制备的瓜氨酸化α-烯醇化酶特异性单克隆抗体将有助于进一步研究瓜氨酸化α-烯醇化酶在相关疾病发病中的作用。

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Cyr61上调人角质形成细胞表达IL-36α的实验研究

袁华英，张洁，余韦臻，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 212-217.

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银屑病是多种炎症因子参与的慢性炎症性皮肤疾病，其中IL-1家族分子IL-36α与银屑病发生发展密切相关。在基因敲除小鼠研究中发现，当敲除IL-36α基因后，再用咪喹莫特制备小鼠银屑病样模型时，皮损和炎症都明显减轻。我们前期研究发现促炎因子Cyr61/CCN1能通过活化角质细胞、促进趋化因子产生而加剧银屑病发生，但其是否也参与IL-36α表达与调控则未见报道。本研究采用人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes cell line， HaCaT cell)在体外研究Cyr61对IL-36α表达的调控作用。结果发现Cyr61能显著上调HaCaT细胞表达IL-36α，而且呈剂量依赖性。进一步通过siRNA干扰技术下调HaCaT细胞中Cyr61的内源性表达，发现当Cyr61表达受抑制后，IL-36α表达也被有效抑制，表明Cyr61能够介导角质细胞表达IL-36α。已有报道表明TNF-α、IL-17和IL-22能够上调角质细胞表达IL-36α，因此我们还采用TNF-α、IL-17和IL-22特异性siRNA干扰这些炎症因子的内源性表达，观察Cyr61对IL-36α的作用。结果表明这些因子被干扰后并不影响Cyr61对IL-36α表达的影响，说明Cyr61能直接促进IL-36α表达。本研究的结果提示Cyr61/CCN1还可能通过上调IL-1家族分子IL-36α而参与银屑病发生。

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CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除HuT-78细胞PD-1分子对其增殖能力的影响

陈艳新，袁圆阳，蒋永帅，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 218-223.

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利用CRISPR/Cas9技术成功敲除人T细胞系HuT-78细胞中编码PD-1分子的基因PDCD1，并比较敲除了PDCD1基因的及对照组的HuT-78细胞增殖能力的差异。实验结果显示敲除PDCD1基因的HuT-78细胞的增殖能力不受PD-L1的影响，为将此技术应用于肿瘤免疫治疗提供了实验依据。

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IL-17在药物难治性颞叶外侧型癫痫中的表达

孙飞吉，范仕兵，谭云，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 224-228.

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研究白介素17(interleukin 17， IL-17)在药物难治性颞叶外侧型癫痫(lateral temporal lobe epilepsy， LTLE)病灶中的表达和分布，探讨IL-17在TLE发生发展中可能的作用。使用real-time PCR、Western blotting、免疫组化及荧光双标检测12例LTLE致痫灶及8例正常对照脑组织中IL-17的表达。结果提示：IL-17在LTLE中的mRNA和蛋白表达水平较对照组明显增高(P < 0.05)，且IL-17高表达于LTLE的神经元、星形胶质细胞以及血管内皮细胞。上述研究结果提示，IL-17可能参与了TLE的发生发展。

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肿瘤标志物CEA、CK19、SCC检测在肺癌患者诊断中的临床价值

陈静静，陈建民，孙泉

现代免疫学. 2017, 37(3): 229-232.

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探讨肿瘤标志物CEA、CK19、SCC检测在肺癌诊断中的临床价值。选择22例肺癌患者为肺癌组，同期30例健康体检者为对照组，检测两者的CEA、CK19、SCC水平并进行分析。肺癌组肿瘤标志物CEA、CK19、SCC水平显著高于正常对照组 (P < 0.05)；肺癌组肿瘤标志物CEA、CK19检测结果的阳性率显著高于正常对照组 ( P < 0.05)；肺癌组CEA与血清CK19呈正相关(r=0.510， P < 0.05)。ROC曲线显示CEA、CK19、SCC曲线下面积分别为0.686、0.742、0.719， CK19的诊断价值最大。肿瘤标志物CEA、CK19、SCC检测是肺癌患者临床诊断重要的血液指标。

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NK细胞应用于肿瘤免疫治疗的研究进展

任海龙，邵东燕，李琦，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 233-237.

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NK细胞作为固有免疫细胞，它的激活无MHC限制也不需预先致敏，其在肿瘤免疫治疗中的作用受到越来越多的关注。然而，在肿瘤发生过程中，肿瘤细胞依然可以逃避NK细胞的杀伤，相关机制也各有报道。为了解决此问题，近年来，在增强NK细胞抗肿瘤活性和提高NK细胞特异性杀伤肿瘤方面取得了令人瞩目的研究成果。这提示NK细胞在肿瘤免疫治疗中具有广阔的应用前景。本文主要对抗体介导的NK细胞、与受者杀伤细胞KIR不匹配的同种异体NK细胞、嵌合抗原受体介导的NK细胞和免疫检查点抑制剂联合NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性进行归纳与总结，以期为后续肿瘤免疫治疗相关基础和临床应用研究提供较为清晰的思路和参考。

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M细胞及其功能的研究进展

薛海燕，李珊，韩波，等

现代免疫学. 2017, 37(3): 238-241.

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M细胞是淋巴滤泡表面的一种特殊细胞，存在于肠上皮细胞之间，它能摄取、提呈抗原, 启动黏膜免疫反应。M细胞的深入研究对了解黏膜免疫反应及疫苗研制有重要意义。为进一步研究M细胞的作用机制和在疫苗中的应用，类人M细胞体外模型的建立方法也在不断优化。本文主要介绍了M细胞的形态、功能及类人M细胞模型的体外建立方法。

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中药多糖调节肿瘤免疫应答研究进展

程伟，邢东炜，张闽光

现代免疫学. 2017, 37(3): 242-246.

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中药多糖是从可能具有抗肿瘤作用的单味中药中提取的有效多糖成分，很多具有抗肿瘤作用的中药多糖与免疫调节有关。本文从中药多糖参与效应性T、B淋巴细胞，Treg细胞，DC，NK细胞、巨噬细胞和γδT细胞的抗肿瘤免疫调节作用以及目前中药多糖临床辅助抗肿瘤免疫调节进展方面作一综述。

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单克隆抗体糖基化修饰研究进展

王冲

现代免疫学. 2017, 37(3): 247-252.

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糖基化修饰对单克隆抗体的结构、功能及药代动力学会产生影响。不同糖型结构通过与FcRs、Clq以及新生Fc受体(neonatal Fc receptor， FcRn)的结合而分别调节抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cytotoxicity， ADCC)、补体依赖的细胞毒作用(complement-dependent cytotoxicity， CDC)以及FcRn介导的药物消除半衰期。不同的细胞表达系统和细胞培养条件均会对糖基化的类型及程度产生影响，进而影响治疗性抗体的疗效以及安全性。通过糖基化工程可以控制特定糖型的形成，进一步优化单克隆抗体的效应功能和降低免疫原性。本文就单克隆抗体糖基化修饰研究进展进行综述。

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性激素与类风湿性关节炎发生发展的研究进展

陈晨，韦坤辰，陈广洁

现代免疫学. 2017, 37(3): 253-257.

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性激素是由性腺和肾上腺产生或由其他物质转化而来的类固醇激素。类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节内炎症细胞浸润为特点的自身免疫性疾病，女性RA的发病率比男性高。本文综述性激素在RA发生发展中的作用。首先，介绍RA和性激素的概况，横向比较两性间性激素的差异，分析不同性激素对RA发展的影响；其次，纵向比较因患病导致的性激素水平变化情况及性激素失衡的发生机制；进一步分析与性激素相关的RA治疗方法。

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CIK细胞抗肿瘤研究进展

王健，刘晓蕊

现代免疫学. 2017, 37(3): 258-262.

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细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer， CIK)是一种由多种细胞因子诱导的以表达CD3+和CD56+细胞为主的异质性细胞群，对多种肿瘤细胞均有明显的细胞毒活性，即使对化疗失败多重耐药肿瘤细胞亦能产生显著的效果。CIK通过表达CD56分子促进细胞间的黏附和结合，可释放穿孔素、细胞溶解素等使靶细胞产生渗透性溶解，当效靶细胞比为30∶1时，抑瘤效果较好，且不易引起移植物抗宿主病，仅有发热等轻度不良反应。CIK治疗可明显提高肿瘤患者生存率，改善晚期肿瘤患者的生存质量，延长生存期，是一种安全有效的过继免疫治疗方法。

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《现代免疫学》稿约

现代免疫学. 2017, 37(3): 263-264.

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聆听大师智慧，领略科学魅力——记上海市免疫学研究所第一届余贺论坛成功举行

现代免疫学. 2017, 37(3): 264.

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2017年, 第37卷, 第3期　刊出日期：2017-05-31

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