现代免疫学

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嗜碱性粒细胞表达炎症因子和归巢受体水平与类风湿性关节炎发病的关系

兰巧芬，陈秋华，廖焕金，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 89-93.

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通过检测类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者外周嗜碱性粒细胞的活化情况，分析其活化与RA发病的关系，进一步阐明RA的发病机制。流式细胞术检测正常对照组和RA患者组外周嗜碱性粒细胞的活化情况及其表达炎症因子和归巢受体的情况。结果显示，RA患者外周嗜碱性粒细胞表达活化标志物CD203c的水平显著高于正常对照组(P<0.05)。RA患者外周表达IL-4、IL-6和IL-13的嗜碱性粒细胞比例以及CD62L和CCR7表达水平均显著高于正常对照组(均P < 0.05)。RA患者外周嗜碱性粒细胞处于高度活化状态，并表达高水平的炎症因子和归巢受体，提示其活化后可能趋化至局部，进而参与RA的发病。

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常染色体显性遗传高IgE综合征患儿外周血循环B淋巴细胞亚群表型分析

田志青，陈戟，吴静，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 94-100.

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研究STAT3突变的常染色体显性遗传高lgE综合征(autosomal dominant hyper-IgE syndrome, AD-HIES)患儿外周循环B淋巴细胞亚群变化，为研究STAT3基因在B淋巴细胞分化中的作用提供理论基础。采用多色荧光流式细胞术检测8例有明确STAT3基因诊断的AD-HIES患儿及10例正常儿童外周循环B淋巴细胞分化及亚群，并利用统计学方法分析两组B淋巴细胞亚群的差异。在骨髓及外周B淋巴细胞分化过程中，与同龄对照组相比，AD-HIES患儿外周循环初始B淋巴细胞显著增高(P=0.008)，而记忆性B淋巴细胞显著降低(P < 0.001)，其差异均存在统计学意义。在记忆性B淋巴细胞相关亚群中，与同龄正常对照组相比，AD-HIES患儿外周循环未类别转化及类别转化记忆性B淋巴细胞均显著降低(P=0.002；P=0.001)，其差异均存在统计学意义。以上结果说明STAT3基因在外周血B淋巴细胞分化中起着正向调控作用。

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CD39和CD73在CD4(+)CD25(high)Foxp3(+)调节性T细胞发挥免疫抑制功能中的作用研究

韩凌，颜克香，钱辉，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 101-106.

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本研究旨在检测正常人CD4⁺CD25^highFoxp3⁺Treg表面腺苷代谢分子的表达，并探索该分子在CD4⁺CD25^highFoxp3⁺Treg发挥抑制功能中的作用。采用流式细胞术检测10例健康献血者外周CD4⁺CD25^highFoxp3⁺Treg表面腺苷代谢分子CD39、CD73的表达，免疫组化染色检测了5例健康人皮肤中腺苷代谢分子CD39、CD73及Foxp3的表达。对5例健康献血者，流式细胞仪分选得到CD4⁺CD25^high、CD4⁺CD25^highCD39⁺、CD4⁺CD25^highCD39⁺CD73⁺ 共3部分细胞，采用 3H-TdR掺入方法检测这3部分T细胞对CD4⁺CD25^-T细胞增殖的抑制作用。同样采用流式细胞术对10例斑块型银屑病患者外周CD4⁺CD25^highFoxp3⁺Treg表面CD39和CD73分子的表达进行分析。结果显示，正常人外周血CD4⁺CD25^highFoxp3⁺Treg与CD4⁺CD25^mid和CD4⁺CD25^-T细胞相比，CD39明显高表达(P < 0.01)，CD73低表达(P < 0.05)。正常人皮肤中，CD39主要表达在表皮角质形成细胞，而CD73则主要分布于真皮中。CD39⁺CD73⁺Treg对CD4⁺CD25^-T细胞增殖的抑制最强(P < 0.01)。银屑病患者外周血CD73⁺CD4⁺CD25^highFoxp3⁺Treg比例较正常人明显降低(P < 0.01)。由此推测腺苷代谢分子是CD4⁺CD25^highFoxp3⁺Treg发挥抑制功能的重要物质，并可能参与银屑病的发生。

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嵌合有HCV多中和抗原表位的乙肝S抗原病毒样颗粒的制备与鉴定

王晓岩，张海，雷迎峰，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 107-110.

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制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBV S抗原病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)，并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时，将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞，48 h后在培养上清中得到自我装配的嵌合HCV多中和表位及包膜蛋白E2的HBV病毒样颗粒(VLP-MEpS， VLP-M2S)。蔗糖密度梯度离心，透析浓缩后，电化学发光法进行HBsAg定量测定、电镜分析和Western blotting鉴定。制备出的嵌合病毒样颗粒VLP-MEpS和VLP-E2S经浓缩后其HBsAg定量最高达到3×10⁴ ng/mL。实验表明我们成功制备出嵌合有HCV多中和抗原表位的HBV VLP，为进一步分析诱导的中和抗体研究奠定基础。

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胰岛素和CTLA4Ig共表达基因治疗小鼠糖尿病模型的效果

邵小青，王璇，秦秋，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 111-114.

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为观察导入CTLA4Ig基因能否延长胰岛素基因治疗的疗效时间，静脉注射链脲佐菌素(streptozotocin， STZ)制备1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus， T1DM)小鼠模型，将24只造模成功的雄性C57小鼠随机分为注射空载腺病毒组、表达胰岛素的腺病毒组(recombinant adenovirus vector/insulin， rAdV/Ins)和共表达胰岛素和CTLA4Ig基因的重组腺病毒(recombinant adenovirus vector/insulin-CTLA4Ig， rAdV/Ins-CTLA4Ig)组，每组8只。采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction， qRT-PCR)方法检测胰岛素、CTLA4Ig及其相关基因在小鼠肝组织的mRNA表达水平。应用简便血糖仪定期检测小鼠血糖水平。rAdV/Ins-CTLA4Ig组小鼠肝组织中CTLA4Ig mRNA的表达量显著高于rAdV/Ins组和空载腺病毒组(P < 0.01)。rAdV/Ins-CTLA4Ig组小鼠肝组织中IFN-γ mRNA的表达显著低于空载腺病毒组(P=0.04)。与注射空载腺病毒组相比较，rAdV/Ins-CTLA4Ig和rAdV/Ins两组小鼠的血糖水平显著降低(均P < 0.05)，且rAdV/Ins-CTLA4Ig组小鼠较rAdV/Ins组小鼠能维持更长的正常血糖时间(P < 0.01)。胰岛素和CTLA4Ig共表达基因的重组腺病毒能转染小鼠肝脏，CTLA4Ig能在肝内成功表达并通过抑制炎症反应延长了胰岛素基因表达时间。

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类风湿关节炎患者外周血miR-146a、miR-155、Ets-1以及IRAK1的表达及临床意义

龙瑞文，周烨，吕蔚然，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 115-120.

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为探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis， RA)患者PBMC中miR-146a、miR-155、Ets-1和IRAK1的表达水平及与病情活动度的相关性，收集RA高活动期患者23例、低活动期患者21例和健康志愿者22例，采用qRT-PCR检测PBMC中miR-146a、miR-155、Ets-1、IRAK1的相对表达水平，同时分析其与临床及实验室指标的相关性。RA患者PBMC的miR-146a、miR-155 相对表达量显著高于健康对照组(P < 0.05)，高活动组高于低活动组(P < 0.05)、低活动组与健康对照组差异无统计学意义(P > 0.05)；RA患者PBMC的Ets-1表达水平与健康对照组差异无统计学意义，高活动组显著低于低活动组和健康对照组(P < 0.05)、低活动组与健康对照组差异无统计学意义(P > 0.05)；RA患者PBMC的IRAK1表达水平显著低于健康对照组(P < 0.05)，高活动组显著低于健康对照组(P < 0.01)、低活动组显著低于健康对照组(P< 0.05)，而高活动组与低活动组间无统计学差异(P > 0.05)。在RA患者中miR-155表达水平与血沉正相关(r=0.319，P=0.042)而与血红蛋白负相关(r=-0.386，P=0.017)；Ets-1与CRP负相关(r=-0.408，P=0.007)；IRAK1与RF、DAS 28、总补体负相关(r=-0.513，P=0.001；r=-0.332，P=0.029；r=-0.49，P=0.015)。研究结果显示，RA高活动组患者PBMC中miR-146a、miR-155表达升高，Ets-1、IRAK1表达降低，可能参与了RA发病过程的调控；但本研究样本量有限，miR-146a、miR-155和Ets-1、IRAK1参与RA发病的关系有待后续大样本研究证实，且相关调控机制仍需进一步深入研究。

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人工高表达LAIR-1对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

周嘉迪，吴肖婕，付强，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 121-126.

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研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1， LAIR-1)对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响，探讨LAIR-1的表达在肝癌中的作用。以LAIR-1慢病毒表达载体(LV-LAIR-1)转染SMMC-7721细胞，建立稳定高表达LAIR-1的细胞株LAIR-1+SMMC-7721。采用流式细胞术(flow cytometry， FCM)、Western blotting、 RT-PCR和激光扫描共聚焦显微技术(laser scanning confocal microscopy， LSCM)等方法鉴定LAIR-1分子在SMMC-7721细胞的表达水平；采用CCK-8试剂盒、FITC Annexin V凋亡试剂盒和Transwell侵袭实验分别检测LAIR-1对SMMC-7721细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。检测结果显示，经LV-LAIR-1转染的SMMC-7721细胞高水平表达LAIR-1分子；功能实验结果显示，与实验组细胞相比，LAIR-1的表达对细胞增殖无明显影响(P > 0.05)，但是能够明显促进细胞凋亡(P < 0.05)，并能够显著抑制细胞的侵袭能力(P < 0.05)。上述研究结果提示，LAIR-1分子的表达可能是影响肝癌细胞生物学特性的一个重要因素。

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人内皮唾液酸蛋白改良双抗体夹心ELISA检测方法的建立

邓桂花，张雯佳，梁少聪，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 127-132.

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为建立肿瘤内皮标志物1(tumor endothelial marker 1， TEM 1)ELISA检测方法，依据TEM 1基因胞外区片段序列及原核表达载体pMAL-p5x多克隆位点设计引物，采用PCR技术从含TEM 1全长基因载体中扩增目的片段，将双酶切的目的基因和载体经胶回收连接后插入表达载体并经测序鉴定，在转入宿主菌后用IPTG诱导目的蛋白表达，用分离纯化后的目的蛋白分别免疫鼠和兔以制备多克隆抗体并用ELISA和流式细胞术对抗体进行鉴定，采用兔抗TEM1为捕获抗体、鼠抗TEM 1为检测抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法，棋盘滴定法探索各抗体最佳工作浓度，倍比稀释TEM 1, 检测建立方法的灵敏度。成功构建的重组表达质粒pMAL-p5x-hCD248，经纯化复性后获得目的蛋白，免疫后获得兔多抗抗体效价为1∶1 024 000、鼠多抗抗体1∶512 000，棋盘法确定捕获抗体、检测抗体及酶标抗体最佳浓度分别为1∶500、1∶16 000和1∶20 000，经检测证实该方法测定下限为18.31 ng/mL；检测50例恶性肿瘤患者与50例健康人血清TEM 1含量，发现差异无统计学意义。

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下调CDH17基因对那可丁耐药性人胃癌细胞裸鼠移植瘤模型的影响

刘蒙，田霞，黄晓东，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 133-137.

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研究下调CDH17基因对那可丁耐药的人胃癌MGC-803细胞裸鼠移植瘤模型的影响，为临床上寻求治疗胃癌新方案提供理论依据。以人胃癌MGC-803细胞作为研究材料，建立该细胞的裸鼠移植瘤模型。同时，用HE染色法观察瘤体组织病理学形态。结果显示，RT-PCR和Western blotting实验中siCDH17慢病毒对胃癌MGC-803细胞中CDH17的转录水平和蛋白质表达水平均具有干扰效果(P < 0.05)。随后将siCDH17慢病毒干扰的人胃癌MGC-803细胞以及对照细胞进行裸鼠皮下移植瘤实验。移植后第6天各组均见皮下肿瘤结块，采用那可丁药物处理并实时检测肿瘤生长情况。结果发现，siCDH17组肿瘤体积和质量明显小于对照组和siNC组(P < 0.05)。且HE染色也发现与对照组比较，siCDH17组的瘤体肿瘤细胞生长受到抑制。因此，下调CDH17基因可以增加胃癌MGC-803细胞对那可丁的敏感性，抑制胃癌MGC-803细胞的生长，最终阻滞裸鼠移植瘤的生长。

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IgA钩状效应结合果糖胺联合诊断IgA型多发性骨髓瘤的临床价值

张靖宇，陈立新，王丽芳，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 138-141.

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为研究血清果糖胺(fructosamine， FMN)水平在IgA钩状效应识别中的应用价值，选取沧州市3家医院2011年1月至2016年10月收治的IgA型多发性骨髓瘤(multiple myeloma， MM)患者(IgA型组)64例、IgG型MM患者(IgG型组)75例、IgM型MM患者(IgM型组)8例和IgA增高的慢性肝病(chronic liver disease， CLD)患者(CLD组)60例作为研究对象，检测血清FMN水平和免疫球蛋白水平，分析FMN与IgA的相关性；选取高浓度IgA血清样本1份，通过倍比稀释配制成不同浓度梯度的样本17份，绘制剂量-反应曲线，找出IgA的平衡点浓度。所有入选病例均排除糖尿病。结果显示，IgA型组FMN水平明显高于其他各组，差异有统计学意义(P < 0.05)，IgG型组、IgM型组和CLD组之间比较差异无统计学意义(P > 0.05)；相关性分析表明，FMN与IgA型组IgA呈明显正相关(r=0.822，P < 0.05)，与CLD组IgA无明显相关性(r=0.143，P > 0.05)；剂量-反应曲线平衡点浓度约为7.0 g/L，达到该点后，反应的吸光度随着浓度的增加而降低。以上结果说明，IgA存在钩状效应，而高浓度IgA的钩状效应可通过FMN有效识别，低浓度IgA则不行。

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强直性脊柱炎新骨形成机制和研究现状

沈逸，何东仪

现代免疫学. 2017, 37(2): 142-145.

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强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis， AS)新骨形成可直接导致脊柱放射学进展，并可改变脊柱的功能状态，从而严重影响患者的生活质量。Wnt通路和BMP通路是AS新骨形成的主要信号通路，多种免疫分子通过调节其中的关键分子DKK1和BMP而影响新骨的形成。炎症和脂肪沉积也在AS骨赘形成中发挥重要作用。本文综述近几年国内外对AS新骨形成机制、影响因素和放射学进展方面的研究现状。

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免疫细胞的代谢重编程及其对免疫功能的影响

王可，王芳，余红秀

现代免疫学. 2017, 37(2): 146-151.

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免疫细胞代谢机制研究是免疫代谢研究的一个重要方向。免疫细胞在增殖、分化以及效应功能的执行等过程中会发生代谢重编程现象。本文综述了不同类型的免疫细胞静息或激活状态下的代谢通路。

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肿瘤微环境的代谢重编程

王可，王芳，余红秀

现代免疫学. 2017, 37(2): 152-156.

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肿瘤细胞独特的有氧糖酵解代谢为其增殖生长提供能量，消耗了肿瘤微环境中的大量营养。肿瘤微环境中也存在大量的免疫细胞，免疫细胞活化、执行效应功能会发生与肿瘤细胞类似的代谢重编程现象，亦需要大量能量。因此免疫细胞与肿瘤细胞之间会存在激烈的代谢竞争，同时也存在密切的代谢调控。通过调整肿瘤代谢和免疫代谢的平衡，人为地抑制肿瘤代谢、增强免疫代谢，提高肿瘤内的免疫功能可能为肿瘤免疫治疗开辟一个新的方向。

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中性粒细胞在牙周炎疾病中作用的研究进展

谢春雨，许子悦，刘好好，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 157-160.

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牙周炎是最常见的口腔疾病之一，是由细菌引发的慢性非特异性炎症。在牙周炎的发生与机体对牙周炎的防御过程中，中性粒细胞起到了双重作用。中性粒细胞处于稳态时，通过趋化吞噬致病菌与释放抗菌物质发挥维护牙周组织健康的作用。中性粒细胞稳态失衡时，其免疫损伤与监控丧失将破坏牙周组织，引起牙周炎的发生与发展。近年来，中性粒细胞胞外诱捕网被认为与牙周炎的发生发展有密切关系。本文综述中性粒细胞与牙周炎的相关性研究近况。

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外泌体作为狼疮性肾炎诊断与防治新靶点的研究进展

伍志泓，杨陈，安宁，等

现代免疫学. 2017, 37(2): 161-164.

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外泌体(exosome)是起源于多泡体的一类细胞外囊泡(extracellular vesicle)，富含脂质、蛋白质及核酸等物质，不仅能作为生物学标志物，同时还具有生物学功能。新近，发现外泌体可以作为狼疮性肾炎(lupus nephritis， LN)诊断和预后的生物学标志物。更重要的是，因外泌体是一种在细胞间拥有独特的物质运输能力的载体，这使其具有成为狼疮性肾炎治疗新靶点的潜力。本文对外泌体作为狼疮性肾炎诊断与防治新靶点的研究进展进行综述。

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外周血和脐血CIK细胞杀伤机制、效果研究进展

王健，曹伟娅

现代免疫学. 2017, 37(2): 165-169.

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细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer， CIK)是一种由多种细胞因子诱导的以表达CD3+和CD56+细胞为主的异质性细胞群，对多种肿瘤细胞均有明显的细胞毒活性。临床常用的CIK主要来源于人脐血和外周血，其杀瘤机制不同，前者以诱导肿瘤细胞的坏死为主，后者通过诱导肿瘤细胞的凋亡而发挥作用。它们均通过表达CD56分子促进细胞间的黏附和结合，能释放穿孔素、细胞溶解素等使靶细胞产生渗透性溶解。当效靶细胞比为30∶1时，抑瘤效果较好。

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Tfh与Tfr的研究进展及其在类风湿性关节炎发展中的作用

邹弋华，付占威，陈广洁

现代免疫学. 2017, 37(2): 170-173.

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滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell， Tfh)和滤泡调节性T细胞(follicular regulatory T cell， Tfr)是近年新发现的两种重要的T细胞类型，它们对促进生发中心(germinal center， GC)形成、B细胞发育及高亲和抗体产生具有重要作用。类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis， RA)是一种常见的慢性系统性自身免疫性疾病，以关节滑囊组织炎症和关节退化为主要特征，同时存在多种自身反应性抗体的异常表达。本文综述Tfh与Tfr的分化与分子标志及主要功能的研究进展，阐述两种细胞在RA发展中的可能作用。

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自噬及其在多发性硬化中的作用

许玲，俞红女，白鹰

现代免疫学. 2017, 37(2): 174-177.

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自噬是高度保守的依赖溶酶体的细胞内物质分解途径，是维持细胞自稳的主要机制，并参与多种神经退行性疾病的发生。自噬现象广泛存在，并能维持组织的内环境稳定，参与调节细胞分化。近年研究发现调节细胞的自噬活性有助于治疗多发性硬化，其对应激状态下神经细胞中错误折叠并沉积的蛋白及衰老受损细胞器的清除具有重要作用。自噬可保护受损的神经细胞，但过度自噬也可促进神经细胞的死亡，因此研究自噬在多发性硬化的不同阶段发挥的不同调节作用，可作为防治多发性硬化的新策略。

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2017年, 第37卷, 第2期　刊出日期：2017-03-31

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